目的 构建CC趋化因子受体2(CCR2)过表达的小鼠CD8+肿瘤浸润淋巴细胞(TILs),探讨CCR2过表达小鼠CD8+TILs活化对小鼠脑胶质瘤细胞增殖与凋亡的影响。方法 取C57BL/6J小鼠肺腺癌组织分离提取CD8+TILs,构建CCR2过表达的慢病毒载体并包装获得慢病毒,然后感染小鼠CD8+TILs;将小鼠CD8+TILs分为CD8+T组(未感染)、CD8+T LV-Empty组(感染空载病毒)、CD8+T CCR2OE组(感染CCR2过表达病毒),采用流式细胞术检测各组CCR2阳性细胞占比。将GL261细胞分为GL261组(常规培养)、A组(GL261细胞与小鼠CD8+TILs共培养)、B组(GL261细胞与小鼠CD8+TILs共培养并加入PD-1抗体)、C组(GL261细胞与CCR2过表达小鼠CD8+TILs共培养)、D组(GL261细胞与CCR2过表达小鼠CD8+TILs共培养并加入PD-1抗体),采用流式细胞术检测各组小鼠CD8+TILs中CD69+、CD107A+、IFN-γ阳性和Granzyme B阳性细胞占比,Annexin V-FITC/PI双染法检测各组中GL261细胞凋亡率。将GL261细胞分为GL261组(常规培养)、E组(GL261与小鼠CD8+TILs共培养)、F组(GL261与小鼠CD8+TILs共培养并加入PD-1抗体)、G组(GL261与CCR2过表达小鼠CD8+TILs共培养)、H组(GL261与CCR2过表达小鼠CD8+TILs共培养并加入PD-1抗体),采用CCK-8法检测各组中GL261细胞增殖能力。将小鼠CD8+TILs分为a组(常规培养)、b组(CCL2处理)、c组(CD3抗体处理)、d组(CD3抗体和CCL2处理),采用流式细胞术检测各组中CCR2过表达小鼠CD8+TILs中CD69+和CD107A+细胞占比。结果 流式细胞术检测结果显示,CD8+T CCR2OE组中CCR2阳性细胞占比显著高于CD8+T LV-Empty组(F=202.80,P<0.05)。在GL261与小鼠CD8+TILs共培养活化实验中,C组CD69+、CD107A+、Granzyme B阳性和IFN-γ阳性细胞占比均高于A组,D组高于B组(F=17.47~146.70,P<0.05)。GL261细胞凋亡检测结果显示,C组凋亡率高于A组,D组高于B组(F=88.27,P<0.05)。GL261细胞增殖实验检测结果显示,G组细胞增殖能力低于E组,H组低于F组(F=40.85,P<0.05)。CD3和CCL2刺激实验结果显示,c组CD69+和CD107A+细胞占比高于a组,d组高于c组(F=108.80、204.06,P<0.05)。结论 小鼠CD8+TILs中CCR2过表达后,可显著增强小鼠CD8+TILs的活化,从而进一步促进脑胶质瘤细胞凋亡并抑制其增殖。
目的 探讨miR155对阿霉素(DOX)诱导的树突状细胞(DC)激活以及T细胞增殖的影响及其机制。方法 4T1细胞分别用含有0、0.1、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、10.0 mg/L DOX的细胞培养液培养24 h(A~H组),同时对转染miR155的4T1细胞用上述不同浓度DOX的细胞培养液培养24 h(I~P组),采用MTT实验检测各组细胞活力并计算IC50值。将4T1细胞分为Q组(空白对照)、R组(转染miR155)、S组(转染miR155+1 mg/L DOX处理)、T组(1 mg/L DOX处理),采用流式细胞术检测各组4T1细胞中钙网蛋白(CRT)的荧光强度,采用ELISA实验和生物发光法检测各组细胞培养上清液中高迁移率族蛋白B1(HMGB1)和三磷酸腺苷(ATP)浓度,采用流式细胞术检测各组CD11c+CD80+CD86+细胞和CD11c+MHCⅡ+细胞所占比例以及CD3+T细胞的增殖率。结果 MTT实验结果显示,DOX处理4T1细胞24 h的IC50为0.95 mg/L,加入miR155未显著增强或减弱DOX效果(P>0.05)。Q组与R组比较,细胞中CRT荧光强度、细胞培养上清液中ATP和HMGB1浓度差异无显著性(P>0.05)。与Q组比较,S组CD11c+CD80+CD86+细胞比例、CD11c+MHCⅡ+细胞比例以及T细胞增殖率显著升高(F=116.28~593.65,P<0.05),R组的上述指标均显著高于Q组(F=54.45~174.27,P<0.05)。结论 miR155可以促进DOX诱导的DC成熟和抗原呈递,以及诱导T细胞的增殖,因此,提高4T1肿瘤细胞中miR155表达水平能增强DOX的治疗效果。
目的 探讨细胞外基质(ECM)硬度对原代人前列腺癌细胞炎症因子表达的影响。方法 将原代人前列腺癌细胞分别接种于0.1 g/L(A组)和8 g/L(B组)ECM溶液孵育过的培养皿中进行培养,使用明场显微镜观察两组细胞生长形态,并于接种第4天时通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白免疫印迹(WB)实验分别检测两组细胞中炎症因子C-C基序趋化因子配体2(CCL2)、CXC趋化因子配体10(CXCL10)、细胞间黏附分子1(ICAM1)、白细胞介素-32(IL-32)的mRNA和蛋白相对表达水平。结果 明场显微镜观察结果显示,接种第24小时时,A组细胞逐渐发生聚集并形成细胞片结构,B组细胞则呈现出多层细胞堆积生长的细胞团形态。RT-qPCR实验结果显示,B组细胞中炎症因子CCL2、CXCL10、ICAM1、IL-32 mRNA的相对表达水平显著高于A组(t=5.30~16.23,P<0.05)。WB实验结果显示,B组细胞中的ICAM1、IL-32和CCL2蛋白相对表达水平显著高于A组(t=2.78~14.72,P<0.05),CXCL10蛋白相对表达水平在A、B两组间无明显差异(P>0.05)。结论 硬度较低的ECM基底可促进原代人前列腺癌细胞中炎症因子CCL2、CXCL10、ICAM1、IL-32的表达。
目的 探讨CDK12抑制剂和PARP抑制剂联用对胰腺癌裸鼠肿瘤和肠道菌群的影响。方法 将胰腺癌PANC1细胞悬液接种于裸鼠右侧背部皮下制备胰腺癌模型。模型制备成功后,随机分为对照组(灌胃玉米油)、CDK12抑制剂组(灌胃CDK12抑制剂+玉米油)、PARP抑制剂组(灌胃PARP抑制剂+玉米油)及双药组(灌胃CDK12抑制剂+PARP抑制剂+玉米油),持续灌胃4周后,常规收集各组裸鼠的瘤体组织及肠道粪便样本,称质量并测量肿瘤的体积;对肿瘤组织进行转录组测序,筛选差异表达基因(DEGs)并进行GO功能和KEGG通路富集分析;对粪便样本进行宏基因组测序,通过最近公共祖先(LCA)算法分析各组肠道菌群的物种丰度,进行KEGG通路功能注释,解析菌群间功能差异,通过主坐标分析(PCoA)可视化各组菌群结构与功能的空间分布差异。结果 双药组裸鼠的肿瘤体积和肿瘤质量均显著小于其他3组(F=22.81、27.09,P<0.05)。对照组与双药组间的DEGs数量最多,为139个,KEGG通路富集分析显示这些DEGs主要富集于质膜组成、细胞黏附和细胞外基质互作、免疫反应和炎性反应等通路;GO功能富集分析显示这些DEGs主要富集在细胞表面、免疫反应、细胞信号传导等功能上。4组裸鼠肠道菌群组成存在显著差异,PCoA显示对照组与其他3组在菌群结构上显著分离,双药组与其他3组在菌群功能上显著分离(P<0.05)。结论 CDK12抑制剂和PARP抑制剂联用可显著抑制胰腺癌裸鼠肿瘤的生长,可能是通过影响肿瘤组织中相关基因的表达和功能,以及裸鼠肠道菌群的结构和功能等多种途径,发挥其肿瘤抑制作用。
目的 探讨镇静需求量表(IOSN)工具在口腔静脉镇静与全身麻醉决策中的应用效果。方法 选取2023年7月—2024年5月于我院无痛牙科中心就诊并接受静脉镇静或全身麻醉下口腔治疗的患者68例。根据镇静方式不同分为两组,其中静脉镇静组33例,全身麻醉组35例。通过IOSN中包括的具体条目对患者进行评分,以分析IOSN工具在两种镇静方式决策中的应用情况,其中IOSN工具包含3个核心组成部分,分别为改良牙科焦虑量表(MDAS)评分、医疗与行为指标(MBIS)评分、治疗复杂度(DTCS)评分。结果 两组患者MDAS评分比较无显著差异(P>0.05)。全身麻醉组IOSN评分显著高于静脉镇静组(t=4.454,P<0.05)。DTCS评分是影响患者IOSN评分及镇静方式选择的主要因素(Z=-6.587,P<0.05)。29.4%的患者实际麻醉方式与IOSN推荐不符,主要受患者主动要求镇静方式或缩短疗程等主观需求影响所致。结论 IOSN工具可有效辅助牙科医生进行镇静决策;临床中应在遵循IOSN评分指导的基础上,加强患者健康宣教和医患沟通,合理引导其主观需求,从而提升决策的科学性与依从性。
目的 探究集落刺激因子1受体(CSF1R)基因多态性与散发性帕金森病(Parkinson's disease,PD)的发病风险及表型间的关系。方法 中国北方汉族人群研究:选择2017年12月—2023年6月于我院神经内科收治的516例散发性PD患者作为病例组,选择我院健康筛查中心同期484例健康体检者作为对照组。收集并比较两组研究对象的一般资料,收集病例组患者的PD常见表型和PD相关量表结果。收集两组研究对象的外周静脉血样本,采用聚合酶链式反应和限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)法检测其CSF1R基因rs216136、rs10079250位点基因型,并比较两组研究对象的基因型及等位基因频率。采用多元线性回归模型分析CSF1R上述两位点不同基因型与PD常见表型及相关量表评分相关性。混合人群研究:从PPMI数据库中选取606例PD患者作为PD组,选取197例健康人群作为健康对照(HC)组,收集两组研究对象的一般资料、CSF1R基因上12个PD相关位点的基因型及等位基因频率,以及PD组患者的PD常见表型以及PD相关量表结果。采用多元线性回归模型分析CSF1R基因上述12个位点的多态性与PD常见表型及相关量表评分关系。结果 在中国北方汉族人群中,两组研究对象的年龄差异显著(t=-9.174,P<0.01);将两组研究对象按年龄分层后,CSF1R rs216136的G/G和A/A基因型频率及等位基因频率差异在50~59岁年龄段的两组研究对象中显现(OR=0.444,95%CI=0.213~0.925,P<0.05)。多元线性回归模型结果显示,CSF1R rs216136与PD患者精神症状的发生有关(β=0.169,95%CI=0.030~0.314, P<0.01)。在混合人群中, 两组研究对象的Hoehn-Yahr分级、 MDS-UPDRS、 MoCA、 ADL、 BJLOT、 BNT、 HVLT、 LNS、 LXFLUE、 SFT、 GDS和RBD评分结果均差异显著(χ2 = 780.616, t = -45.672~10.574, P<0.05)。多元线性回归模型分析显示, CSF1R基因多态性与人群中纹状体左侧尾状核多巴胺转运体(DAT)结合率下降、MDS-UPDRS Part Ⅰ评分增高、LNS和LXFLUE-A评分降低有关(P<0.05)。结论 CSF1R基因多态性可能是中国北方汉族人群PD早发的影响因素,且与PD精神症状的发生有关。在混合人群中,CSF1R基因多态性与PD发病风险无显著相关性,但其可能降低纹状体DAT结合率并加重PD的认知功能损害。
目的 探讨炎症性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)患者疲劳症状发展轨迹及其影响因素。方法 采用便利抽样法选取2023年7月—2024年5月就诊于青岛大学附属医院消化内科的290例IBD患者作为研究对象,收集患者的人口学及疾病特征资料,并在患者初次就诊、就诊后3个月、就诊后6个月时进行疲劳程度评估。采用潜在剖面分析(LPA)模型识别IBD患者疲劳症状发展轨迹的潜在类别,并根据该类别将患者分组。采用单因素分析筛选各组患者人口学及疾病特征资料中有差异的指标,并将上述指标纳入多因素logistic回归模型,分析患者不同类别疲劳症状发展轨迹的影响因素。结果 LPA模型分析结果显示,IBD患者的疲劳症状发展轨迹存在四种潜在类别,分别为低疲劳型(组)、中疲劳-缓解型(组)、高疲劳-下降型(组)、高疲劳-稳定型(组)。单因素及多因素logistic回归模型分析显示,年龄、性别、BMI、贫血情况、应用激素或者生物制剂治疗情况、病情活动性、睡眠质量及焦虑和抑郁状况均为IBD患者疲劳症状发展轨迹的影响因素(P<0.05)。结论 IBD患者初次就诊后短期内疲劳症状发展轨迹存在低疲劳型、中疲劳-缓解型、高疲劳-下降型、高疲劳-稳定型四种潜在类别,医护人员可依据疲劳症状发展轨迹的影响因素及早识别高疲劳患者,实施精准干预,从而有效改善IBD患者的疲劳症状发展轨迹。
目的 探究男性痛风患者发生骨侵蚀的危险因素。方法 选择2020年1月—2021年12月初次就诊于青岛大学附属医院痛风临床医学中心并进行肌骨超声检查的男性痛风患者共297例,根据肌骨超声检查结果中的骨侵蚀情况,将患者分为有骨侵蚀组73例和无骨侵蚀组224例。收集并比较两组患者的临床病理指标和超声检查结果。采用多因素logistic回归模型分析男性痛风患者骨侵蚀的危险因素,并通过受试者工作特征(ROC)曲线分析有统计学意义因素对骨侵蚀的诊断效能。结果 两组患者的年龄、痛风病程、血清尿素氮水平、血清肌酐水平、eGFR、有痛风家族史、过去1年痛风频发、使用秋水仙碱的比例、痛风石有无、痛风石大小和多发情况以及双轨征、滑膜增厚情况均有显著差异(Z=-4.626~-3.361,t=-5.787,χ2=4.325~33.515,P<0.05)。多因素logistic回归分析显示,eGFR下降、有痛风家族史、过去1年痛风频发、存在双轨征及痛风石增大是男性痛风患者发生骨侵蚀的危险因素(Wald χ2=4.115~12.263,P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,痛风石大小在预测男性痛风患者发生骨侵蚀时的曲线下面积(AUC)为0.744,最佳截断值为0.565 cm。结论 eGFR降低、有痛风家族史、过去1年痛风频发、超声征象有双轨征和痛风石增大是男性痛风患者发生骨侵蚀的潜在危险因素;其中,痛风石大小是预测男性痛风患者骨侵蚀发生风险的关键指标。
目的 探究丙戊酸(VPA)、拉莫三嗪(LTG)和左乙拉西坦(LEV)单一药物治疗对成年癫痫患者体内细胞铁死亡的影响。方法 选择2022年12月—2024年9月就诊于青岛大学附属医院神经内科的癫痫患者95例作为癫痫组,并根据用药种类分为VPA组、LTG组及LEV组,另外选择同期同院的年龄、性别匹配的健康体检者93例作为对照组。采集各组研究对象入组时及癫痫患者用药6个月后空腹外周静脉血,采用比色法测定血清亚铁离子(Fe2+)、谷胱甘肽(GSH)及丙二醛(MDA)水平,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和蛋白免疫印迹(WB)法检测外周血中谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)和溶质载体家族7成员11(SLC7A11)的表达水平,比较各组上述指标结果。结果 癫痫组患者入组时血清Fe2+、 MDA水平显著高于对照组, GSH、 GPX4及SLC7A11水平显著低于对照组(t=15.62~18.17, Z=-6.97~3.16, P<0.05)。VPA、 LTG及LEV均可降低癫痫组患者的血清Fe2+、 MDA水平(t=5.14~14.75, P<0.05),其中LTG、 VPA对Fe2+、 MDA水平的降低程度显著高于LEV(F=5.94、7.05,t=-3.56~-2.38,P<0.05)。VPA、LTG及LEV均能抑制癫痫患者外周血GSH、 GPX4、 SLC7A11水平下调(t=3.06~11.15, P<0.05), 但是三种药物的抑制程度无显著差异(P>0.05)。结论 VPA、 LTG、 LEV三种抗癫痫药均能抑制成年癫痫患者体内细胞铁死亡, 但LTG、 VPA对铁死亡进程中铁过载和脂质过氧化的改善效果优于LEV。
目的 探究孕晚期室内尘螨水平对母婴血液中Th2相关因子水平的影响。方法 选择于我院孕检并于2023年7月—2024年6月足月顺产单胎的78例健康产妇及其婴儿作为研究对象,根据产妇是否为特异性体质将产妇及婴儿分为特异性组和非特异性组,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定孕晚期产妇家中尘螨暴露水平,并据此将产妇及婴儿进一步分为低、中、高暴露亚组。收集各组产妇的性别、年龄、体质量指数及婴儿性别、出生体质量、喂养方式等一般资料,采集产妇产前即刻的外周静脉血和婴儿出生时的脐带血,检测血清中Th2相关因子(IL-33、IL-13、IgE)的水平并进行比较,随访产后早期(3个月内)婴儿特应性皮炎(AD)发生情况。结果 特异性组中,中、高暴露亚组产妇血清IL-33、IL-13、IgE及婴儿血清IL-33、IL-13水平均显著高于低暴露亚组(F=3.764~9.454,P<0.05);非特异性组中,高暴露亚组婴儿血清IgE水平显著高于低暴露亚组(F=3.327,P<0.05)。此外,特异性组中、高暴露亚组产妇血清IL-13、IgE水平及婴儿血清IL-33、IgE水平显著高于非特异性组中、高暴露亚组(t=2.552~8.604,P<0.05)。婴儿早期AD发病与其出生时血清IL-33、IgE水平,以及产妇的特异性体质和产前血清IL-33、IL-13、IgE水平有关(χ2=11.522,t=2.805~4.490,P<0.05)。结论 母婴围生期血清Th2相关因子水平升高与孕晚期室内尘螨水平升高有关,该关联在具有特异性体质的产妇中尤其明显,且遗传与环境的交互作用会增加婴儿早期患AD的风险。
目的 探讨白细胞介素(IL)-6、IL-8、基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)以及miRNA-128、miRNA-381与老年下肢动脉硬化闭塞症(lower extremity atherosclerotic occlusive disease,LEASO)临床分期的相关性。方法 选择2024年1月—2025年1月于青岛市市立医院血管外科住院治疗的167例LEASO患者(年龄≥65岁),根据Fontaine分期分为A组(Ⅰ、Ⅱ期)和B组(Ⅲ、Ⅳ期)。收集患者基线资料(性别、年龄、BMI、患病时间、吸烟史、合并症、用药方案等),采用酶联免疫吸附实验(ELISA)、实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)技术检测血清中IL-6、IL-8、TIMP-1水平及miRNA-128、miRNA-381相对表达量,采用点二列相关分析方法分析两组患者血清中的miRNAs及炎症因子水平与临床分期的相关性,采用logistic回归分析LEASO临床进展的影响因素。结果 B组患者血清中IL-6、IL-8水平显著高于A组(Z=3.074、7.354,P<0.05),血清中TIMP-1水平显著低于A组(Z=-8.031,P<0.05);B组患者血清中miRNA-128、miRNA-381的相对表达量显著低于A组(Z=-2.882、-3.164,P<0.05);点二列相关分析结果显示,血清中IL-6、IL-8水平与临床分期呈正相关(r=0.154、0.557,P<0.05),血清中TIMP-1及miRNA-128、miRNA-381水平与临床分期呈负相关(r=-0.617、-0.251、-0.253,P<0.05)。多因素logistic回归分析显示,血清中IL-8的水平升高(OR=1.069,95%CI=1.025~1.115,P<0.05)、TIMP-1的水平降低(OR=0.961,95%CI=0.935~0.987,P<0.05)、miRNA-381的表达水平降低(OR=11.674,95%CI=1.678~81.228,P<0.05)以及患病时间长(OR=2.669,95%CI=1.744~4.087,P<0.05)为LEASO临床进展的危险因素。结论 血清中IL-8、TIMP-1以及miRNA-381水平与LEASO临床分期密切相关,有可能作为评估LEASO病情严重程度的潜在生物标志物。
目的 探讨婴儿新型冠状病毒感染性肺炎(简称新冠肺炎)的临床及影像学特征。方法 回顾性分析2022年9月—2023年3月于我医院收治的30例新冠肺炎和60例社区获得性肺炎(CAP)婴儿的临床资料。结果 新冠组和CAP组患儿的发热时间及发热、喘息、声嘶喉鸣、惊厥、睡眠障碍、咳嗽患儿构成比均有显著差异(χ2=4.956、16.012,t=2.269,P<0.05),但两组患儿的肺部影像学特征比较无显著差异(P>0.05);新冠组和CAP组患儿外周血中白细胞计数、血小板计数及血清肌酸激酶同工酶MB水平均有显著差异(t=2.204~3.312,P<0.05)。结论 新冠肺炎婴儿肺部影像学改变无特异性,但在发热基础上容易出现声嘶喉鸣、喘息、惊厥和睡眠障碍等症状,且易发生心肌受累。
目的 分析多囊肝病(polycystic liver disease,PLD)患者的临床病理学特征及基因突变特征。方法 回顾性分析2019年4月—2023年12月就诊我院肝脏移植科的12例PLD患者的临床资料,分析其临床及组织学特点,并对术后肝组织病理标本行全外显子测序。结果 12例PLD患者中,男女各6例,年龄(52.3±12.0)岁;其中8例患者行同种异体肝移植,2例行腹腔镜下肝囊肿开窗术,1例行同种异体肝肾联合移植,1例行腹腔镜下左半肝切除术。全部患者的肝组织病理改变较一致,肝囊肿的囊壁由增生纤维组织构成,衬覆单层扁平、立方或柱状上皮,不同程度的纤维组织增生使囊壁厚度不一,同时伴有慢性炎细胞浸润及退变出血等的改变。全外显子测序结果显示,有8例患者存在PKD1、PKHD1、PRKCSH、PKD2以及LRP5五个PLD致病性基因变异,其中PKD1、PKHD1、PKKCSH突变比例较高,突变类型包括错义突变、插入缺失。结论 PLD患者可能存在以PKD1、PKHD1、PKKCSH为主的多个PLD致病性突变基因,但各突变类型的肝脏组织病理学特征相似。
目的 分析青岛市公立综合医院医疗服务效率情况与变动趋势,为医院提高医疗服务效率提供参考。方法 采用数据包络分析(DEA)法的超效率EBM模型和Malmquist指数对2019—2023年青岛市公立综合医院的医疗服务效率进行静态和动态分析,评价涉及的投入指标包括卫生技术人员数、实有床位数和万元以上设备总价值3项,产出指标包括门诊人次数和出院人数2项。结果 静态效率方面,2019—2023年青岛市公立综合医院医疗服务效率均值从0.899增长至0.981,总体效率均值为0.942,呈增长趋势,但总体处于无效状态;动态效率方面,全要素生产率(TFP)指数总体均值<1,且TFP指数>1的医院数量波动较大,医院整体效率不稳定,其中技术进步为主要影响因素。结论 青岛市公立综合医院的医疗服务效率平均水平较为理想,但仍需继续提升。建议医院以推动技术进步为锚点,针对薄弱环节采取措施,切实提高医疗服务效率,同时加强院间联合,实现区域医疗服务水平整体跃升。
