论著
齐贵彬, 高建步, 张明磊, 张永杰, 解莉莉, 李娜
目的 探讨Notch信号通路与Toll样受体(TLR)4相互作用对冠心病患者CD14+单核细胞功能的影响。方法 选择2019年4月-2020年8月我院收治的冠心病患者101例,根据病情分为稳定型心绞痛(SAP)组、不稳定型心绞痛(UAP)组和急性心肌梗死(AMI)组,并选择同时期体检健康者40例为对照组。采集各组研究对象的空腹外周静脉血并分离单个核细胞,实时荧光定量逆转录PCR(RT-qPCR)检测单个核细胞中Notch1、Notch2及TLR1~10 mRNA表达水平。CD14磁珠分选三组冠心病患者外周血单个核细胞中的CD14+单核细胞,使用DAPT(Notch信号通路抑制剂)和CRX-675(TLR4激动剂)刺激培养后,检测CD14+单核细胞中TLR2、TLR4、TLR9及Notch1、HES1、HES5 mRNA表达水平;采用酶联免疫吸附实验检测三组患者细胞培养上清液中IL-6、TNF-α水平;采用蛋白免疫印迹实验检测CD14+单核细胞中TIR结构域接头分子(TRIF)、抗髓样分化因子88(MyD88)和核因子-κB(NF-κB)p65亚基蛋白的相对表达水平。结果 三组冠心病患者的外周血单个核细胞中Notch1、TLR2、TLR4、TLR9 mRNA表达水平均显著高于对照组,且AMI组患者上述mRNA表达水平均最高(F=10.295~16.558,tLSD=7.918~18.271,P<0.05)。DAPT刺激后,三组冠心病患者外周血中CD14+单核细胞TLR4 mRNA表达水平均显著低于刺激前(t=5.871~9.069,P<0.05),其中AMI组降低幅度显著高于UAP组和SAP组(F=5.522,tLSD=2.613、2.625,P<0.05);CRX-675刺激后,三组冠心病患者外周血CD14+单核细胞中Notch1、HES1、HES5 mRNA表达水平均显著高于刺激前(t=9.218~17.483,P<0.05),其中AMI组升高幅度显著高于UAP组和SAP组(F=30.133~212.120,tLSD=4.921~11.107,P<0.05)。CRX-675刺激后,三组冠心病患者外周血细胞培养上清液中TNF-α、IL-6水平均显著高于刺激前(t=5.806~8.129,P<0.05);DAPT+CRX-675共同刺激以后,三组冠心病患者外周血细胞培养上清液中TNF-α、IL-6水平均显著低于CRX-675单独刺激后(t=5.216~9.063,P<0.05),且AMI组降低幅度显著高于UAP组和SAP组(F=104.894、4.798,tLSD=2.440~10.977,P<0.05)。DAPT+CRX-675共同刺激后,三组患者外周血CD14+单核细胞中TRIF、NF-κB p65蛋白表达水平均显著低于CRX-675单独刺激后(t=5.052~9.921,P<0.05),其中AMI组降低幅度显著高于UAP组和SAP组(F=4.580、4.200,tLSD=2.414~3.461,P<0.05)。结论 Notch信号通路与TLR4相互作用或可通过影响外周血CD14+单核细胞的功能,导致冠心病患者病情进展。