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目的 体外培养主动脉瓣膜间质细胞(AVICs)并构建其钙化模型,探讨细胞焦亡在钙化性主动脉瓣膜疾病(calcific aortic valve disease,CAVD)中的作用。方法 以钙化诱导培养基诱导AVICs钙化,依据细胞处理方式分为对照组(标准培养基培养)、钙化组(钙化诱导培养基培养)和抑制剂组(VX-765预处理24 h后钙化诱导培养基培养),采用CCK-8法测定各组细胞的存活率,茜素红染色检测各组细胞钙结节表达水平,采用免疫印迹法检测各组细胞中钙化相关蛋白OPN、RunX2,细胞焦亡相关蛋白NLRP3、GSDMD、Caspase-1、GSDMD-N、Cleaved-Caspase-1以及炎症因子IL-1β、IL-18的相对表达水平。结果 与对照组相比,钙化组AVICs的钙结节增多,钙化相关蛋白OPN、RunX2及细胞焦亡相关蛋白NLRP3、GSDMD、Caspase-1、GSDMD-N、Cleaved-Caspase-1相对表达水平均增高(t=4.586~15.842,P<0.01);与钙化组相比,抑制剂组AVICs的钙结节减少,钙化相关蛋白OPN、RunX2,细胞焦亡相关蛋白NLRP3、GSDMD、Caspase-1、GSDMD-N、Cleaved-Caspase-1及炎症因子IL-1β、IL-18相对表达水平均降低(t=5.789~19.227,P<0.01)。结论 AVICs钙化过程中存在细胞焦亡,应用VX-765干预钙化培养基诱导的AVICs可在一定程度上抑制细胞焦亡过程。
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目的 探讨OTUD3敲除对神经干细胞(NSCs)中缝隙连接蛋白43(Cx43)表达的影响。方法 分离提取妊娠第14天时野生型(WT)和OTUD3-/-胚胎小鼠的脑皮质组织蛋白,同时进行体外培养WT-NSCs和OTUD3-/--NSCs,并根据细胞状态传代,传代至第3代时,应用倒置显微镜观察第1、3天时OTUD3-/--NSCs和WT-NSCs生长状态。用细胞免疫荧光染色检测WT-NSCs和OTUD3-/--NSCs中Ki67、Nestin和β-tubulin Ⅲ的表达情况,应用Western blotting方法检测WT-NSCs和OTUD3-/--NSCs中以及WT和OTUD3-/-胚胎小鼠脑皮质组织中OTUD3和Cx43表达变化情况。结果 培养并传代至第3代的WT-NSCs和OTUD3-/--NSCs生长状态良好,细胞免疫荧光染色显示Ki67、Nestin和β-tubulin Ⅲ染色阳性。与WT-NSCs相比,OTUD3-/--NSCs中OTUD3和Cx43表达量显著下调(t=16.82、3.21,P<0.05);与WT胚胎小鼠相比,OTUD3-/-胚胎小鼠脑皮质组织中OTUD3和Cx43表达量显著下调(t=10.04、20.41,P<0.05)。结论 OTUD3敲除后,NSCs中Cx43表达量显著下调,Cx43可能在促进NSCs的增殖和神经发育过程中发挥调节作用。
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目的 探究缺氧肝癌源性外泌体miR-1260b对肿瘤相关巨噬细胞M2亚型的影响及其机制。方法 人肝癌细胞97H(MHCC97H)细胞经100 μmol/L CoCl2处理24 h后获得缺氧97H细胞。利用丙二醇甲醚醋酸酯(PMA)处理THP-1细胞24 h后获得M0巨噬细胞,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法检测THP-1细胞中CD11b的相对表达量。将常氧/缺氧97H细胞与M0巨噬细胞共培养48 h后,采用RT-qPCR方法检测巨噬细胞中CD163、CD206和TNF-α基因相对表达量。通过低温差速离心法提取常氧/缺氧97H细胞的外泌体,通过生物透射电子显微镜观察外泌体的形态,采用纳米颗粒跟踪分析仪(NTA)分析粒子直径,采用Western blot法检测外泌体中凋亡诱导因子6相互作用蛋白(Alix)和钙联蛋白相对表达量。外泌体与M0巨噬细胞共培养48 h后,采用RT-qPCR方法检测M0巨噬细胞中CD206相对表达量。用携带Dil染剂的外泌体与M0巨噬细胞共培养24 h,采用荧光显微镜观察M0巨噬细胞内的荧光反应。采用RT-qPCR方法检测外泌体中miR-1260b相对表达量,并向M0、M2巨噬细胞内转染miR-1260b Mimic/Inhibitor后,采用RT-qPCR方法检测细胞内CD206、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)相对表达量。将转染了miR-1260b Inhibitor的常氧/缺氧97H细胞共培养M0巨噬细胞,采用RT-qPCR方法检测M0巨噬细胞CD206、TNF-α相对表达量。结果 PMA处理THP-1细胞24 h后所获得的M0巨噬细胞CD11b显著高表达(t=78.14,P<0.05)。缺氧97H细胞与M0巨噬细胞共培养可以使巨噬细胞CD163以及CD206的表达升高,TNF-α的表达降低(t=14.23~46.88,P<0.05)。成功分离并提取缺氧97H细胞分泌的外泌体颗粒,其可以被M0巨噬细胞吞噬。Western blot结果显示,外泌体颗粒高表达Alix蛋白且基本不表达钙联蛋白。RT-qPCR检测显示,缺氧肝癌源性外泌体共培养M0巨噬细胞后可以使M0巨噬细胞高表达CD206(t=17.06,P<0.05);缺氧肝癌源性外泌体高表达miR-1260b(t=12.09,P<0.05);转染miR-1260b Mimic后,M0巨噬细胞可以高表达CD206,低表达TNF-α(t=8.82、8.22,P<0.05),转染Inhibitor后,M2巨噬细胞可以高表达TNF-α(t=16.88,P<0.05)。常氧97H细胞预先转染miR-1260b Mimic可以高表达CD206,低表达TNF-α(t=26.95、21.45,P<0.05);而缺氧97H细胞预先转染miR-1260b Inhibitor后显著影响了CD206、TNF-α的表达(t=9.09、12.54,P<0.05)。结论 缺氧肝癌细胞源性的外泌体可以诱导M2巨噬细胞极化,miR-1260b是缺氧肝癌细胞源性外泌体对巨噬细胞产生极化影响的关键靶分子,该机制进而促进了肝癌细胞免疫逃逸。
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目的 探讨转化生长因子β1(TGF-β1)对膀胱癌T24细胞增殖、迁移能力的影响及其机制。方法 以浓度为0、1、5、10、20、40 μg/L的TGF-β1处理T24细胞24 h,采用MTT法检测细胞的增殖活性,采用细胞划痕方法检测其迁移能力,采用Western blot检测细胞中程序性死亡配体-1(PD-L1)蛋白的相对表达量;使用浓度为5 μg/L的TGF-β1处理T24细胞0、0.5、1、2、6、24 h,采用Western blot实验检测细胞PD-L1蛋白及磷酸化丝苏氨酸蛋白激酶(p-AKT)和磷酸化细胞外调节激酶(p-ERK)蛋白的相对表达量;将T24细胞分为A~C组,A组使用正常培养基培养,B组培养基中加入终浓度为5 μg/L的TGF-β1培养,C组培养基加入终浓度为5 μg/L的TGF-β1及SB431542培养,Western blot方法检测A~C组细胞中PD-L1相对表达量;将T24细胞分为D~G组,D组使用正常培养基培养,E组培养基中加入终浓度为5 μg/L的TGF-β1培养,F组培养基中加入终浓度为5 μg/L的TGF-β1、AKT抑制剂MK2206培养,G组培养基加入终浓度5 μg/L的TGF-β1、ERK抑制剂U0126处理T24细胞,均处理24 h,Western blot方法检测D~G组细胞中p-AKT、p-ERK和PD-L1相对表达量。结果 浓度0、1、5、10、20、40 μg/L的TGF-β1处理T24细胞24 h,其他浓度的TGF-β1处理T24细胞的增殖能力相较于0 μg/L时均显著增强(t=3.59~12.18,P<0.05),各浓度之间T24细胞的迁移率没有显著差异(P>0.05),浓度为5 μg/L时相较于其他浓度,PD-L1蛋白表达明显升高(t=3.22~5.64,P<0.05);浓度为5 μg/L的TGF-β1处理T24细胞0、0.5、1、2、6、24 h后,T24细胞PD-L1蛋白表达随时间延长逐渐升高(F=199.20,P<0.05),并且处理时间为0.5 h相较于其他处理时间,p-AKT、p-ERK表达量显著升高(t=6.26~64.24,P<0.05);B组与A组比较,T24细胞PD-L1蛋白表达水平明显升高(t=31.24,P<0.05),C组与B组比较,PD-L1蛋白的表达水平降低(t=17.04,P<0.05);E组与D组比较,T24细胞的PD-L1、p-AKT、p-ERK蛋白水平明显升高(t=9.44~37.29,P<0.05),G组与E组比较,p-AKT、PD-L1蛋白表达水平显著降低(t=104.40、6.74,P<0.05);F组与E组比较,p-ERK、PD-L1蛋白表达水平显著降低(t=24.26、17.01,P<0.05)。结论 TGF-β1可以促进膀胱癌T24细胞增殖和细胞内PD-L1表达,不影响其迁移,其作用机制可能是通过促进细胞内PD-L1、p-ERK和p-AKT表达实现的。
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目的 探讨Hisense计算机辅助手术系统(CAS)在小儿外科疾病手术治疗中的应用价值。方法 回顾性分析2016年3月—2022年10月于本院小儿外科行手术治疗患儿的临床资料,所收集的病例术前均采用Hisense CAS对病灶及周围组织进行三维重建,分别分析胸部、腹部及盆腔疾病三维重建图像、病灶模拟手术切除体积、患儿手术可行性及随访结果等,探讨Hisense CAS在小儿外科疾病手术治疗中的应用及意义。结果 经Hisense CAS三维重建后可清晰显示病灶周围脉管走行和分支情况,可从任意角度观察病灶与其周围脉管结构的空间解剖关系,准确对病变进行定位和评估。本研究中323例患儿术前进行了三维重建,重建例次达372例次,全部患儿均按术前模拟手术设计方案顺利进行了手术。323例患儿术后有287例进行了随访,36例失访,随访时间为9(2,16)个月。286例患儿均无明显术后并发症,生存良好;1例肾母细胞瘤患儿术后出现肠梗阻,二次手术后患儿恢复良好。结论 Hisense CAS能够对肝肾等实质器官肿瘤进行准确术前评估,并辅助设计最优手术方案,使小儿外科手术更加精准、安全及有效,对外科手术精准实施具有重要指导意义。
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目的 探讨Theta节律刺激(iTBS)后行镜像疗法(MT)对脑卒中患者上肢运动功能及生活自理能力的影响。方法 选取2020年4月—2021年5月于威海市立医院康复医学科住院的脑卒中患者45例,随机分为对照组、iTBS组和联合组(每组15例)。3组患者均接受常规康复治疗及作业治疗,iTBS组作业治疗前行iTBS刺激,联合组作业治疗前行iTBS刺激及MT。使用FUGL-MEYER简易上肢运动功能量表(UL-FMA)和手臂动作调查量表(ARAT)对患者上肢运动功能进行评价,使用改良Barthel指数(MBI)对患者日常生活活动能力进行评价,比较3组患者治疗前及治疗4周后上述各指标结果。结果 3组患者治疗前UL-FMA、ARAT、MBI评分无显著差异(P>0.05),治疗4周后UL-FMA、ARAT、MBI评分均较治疗前显著提高(t=4.320~28.441,P<0.05)。iTBS组、联合组UL-FMA、ARAT、MBI评分治疗前后差值与对照组相比差异有显著性(t=3.307~6.592,P<0.05),iTBS组与联合组比较差异有显著性(t=2.248~2.824,P<0.05)。结论 iTBS联合MT可明显改善脑卒中患者上肢运动功能和自理生活能力,建议在临床推广使用。
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目的 通过生物信息学方法分析1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢嘧啶(MPTP)诱导的帕金森病(Parkinson’s disease,PD)模型小鼠黑质组织中的差异表达基因(DEGs),探讨其在PD疾病进程中的作用。方法 从GEO数据库中检索正常组与PD模型组小鼠黑质组织中基因表达谱芯片数据,通过生物信息学方法分析并筛选出正常组与PD模型组小鼠黑质组织中的DEGs,用Metascape工具进行GO功能富集分析和KEGG通路分析。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法检测调控神经元凋亡、朊病毒传播过程中关键功能性基因的表达量。结果 在MPTP诱导PD模型组小鼠黑质组织中174个DEGs表达上调,173个DEGs表达下调(P<0.05,变化倍数>0.26)。上调的DEGs显著富集在调控朊病毒传播、神经元发育、铁离子稳态、跨质膜输出等通路;而下调的DEGs显著富集于调控突触囊泡释放、跨突触复合体传递、神经元凋亡、细胞骨架中肌动蛋白的调节等通路。与正常组相比,PD模型组小鼠黑质组织中Bdnf、Fbxw7的表达量均显著降低(t=2.25、2.39,P<0.05),sod1的表达量无显著差异(P>0.05)。结论 筛选得到的调控神经元凋亡的关键功能性基因Bdnf和Fbxw7在PD模型中有显著改变,为进一步阐明其在PD病理进展中的作用奠定了基础。
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目的 分析急性缺血性脑卒中(acute ischemic stroke, AIS)患者急性肾损伤(acute kidney injury, AKI)发生的危险因素并构建Nomogram预测模型。方法 以2020年1月—2021年6月在我院住院的1 633例AIS患者为研究对象,根据是否发生AKI分为AKI组和非AKI组,利用Lasso-Logistic回归分析AIS患者发生AKI的危险因素,构建Nomogram预测模型,采用受试者工作特征曲线(ROC)、一致性指数(C-Index)、校准曲线及决策曲线分析(DCA)评价模型预测价值。结果 1 633例AIS患者中,238例(14.57%)患者发生了AKI。Lasso-Logistic回归分析结果显示,中性粒细胞升高、凝血酶原时间延长、乳酸脱氢酶升高、肾小球滤过率降低、有输血史、合并慢性肾脏病、使用抗生素、使用双嘧达莫、使用利尿剂、使用β受体阻滞剂是AIS患者发生AKI的独立危险因素(P<0.05)。Nomogram预测模型的ROC曲线下面积为0.797(95%CI=0.769~0.866,P<0.01),内部验证的C-Index为0.762(95%CI=0.761~0.762,P<0.01)。校准曲线显示模型的一致性良好,DCA提示模型具有一定的临床实用性。结论 本研究明确了AIS患者发生AKI的危险因素,并构建了Nomogram预测模型,有助于临床早期识别和防治AKI,以改善患者预后。
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目的 探讨孕烷X受体(PXR)、多药耐药蛋白1(MDR1)、细胞色素P450 3A5(CYP3A5)和细胞色素P450 2B6(CYP2B6)在高级别浆液性卵巢癌(high grade serous ovarian cancer,HGSOC)组织中的表达及其意义。方法 选取2019年9月—2021年12月青岛市市立医院妇科收治的56例HGSOC患者作为试验组,据其对铂类药物的耐药情况分为耐药组(24例)和敏感组(32例),另外选取妇科同期收治的16例子宫肌瘤患者作为对照组。采用免疫组织化学、实时定量荧光PCR及蛋白印迹法对试验组患者HGSOC组织和对照组患者正常输卵管组织中PXR、MDR1、CYP3A5和CYP2B6的表达情况进行检测。结果 与对照组相比较,试验组患者PXR、MDR1、CYP3A5、CYP2B6阳性表达率显著升高(χ2=12.879~17.174,P<0.05),mRNA相对表达量显著升高(t=9.746~17.640,P<0.05),蛋白表达量显著升高(t=13.312~60.448,P<0.05);与敏感组相比,耐药组患者PXR、MDR1、CYP3A5、CYP2B6阳性表达率显著升高(χ2=4.371~8.549,P<0.05),mRNA相对表达量显著升高(t=6.859~19.000,P<0.05),蛋白表达量显著升高(t=8.693~27.670,P<0.05)。HGSOC患者PXR与CYP3A5、CYP2B6的表达呈正相关(r=0.332、0.308,P<0.05),与MDR1的表达无明显相关性(P>0.05)。结论 PXR、MDR1、CYP3A5、CYP2B6在HGSOC患者的肿瘤组织中呈高表达,其可能参与HGSOC的发生发展过程。PXR、MDR1、CYP3A5和CYP2B6的表达检测可用于判断HGSOC对化疗的敏感性,有助于为术后化疗提供指导意见。
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目的 探讨HALP+NIHSS评分对大动脉粥样硬化(large artery atherosclerosis,LAA)型脑梗死患者预后的预测价值。方法 回顾性分析2020年1月—2021年10月于我院确诊的500例LAA型脑梗死患者的临床资料。在发病后第30天时通过改良Rankin量表(mRS)进行临床转归评估,根据mRS评分结果分为预后良好组(mRS评分≤2分)和预后不良组(mRS评分>2分),对两组患者的临床资料进行比较。采用Logistic回归分析评价影响LAA型脑梗死患者预后不良发生的因素,并通过受试者工作特征曲线(ROC)分析NISHH评分、HALP评分及NISHH+HALP评分对LAA型脑梗死患者预后的预测价值。结果 多因素Logistic回归分析显示,高龄、高血压、NIHSS评分高、LDL水平升高为LAA型脑梗死患者预后不良的危险因素(P<0.05);HALP评分的升高为影响LAA型脑梗死患者预后不良发生的保护因素(P<0.05)。ROC曲线分析显示,HALP+NIHSS评分联合预测价值显著优于HALP评分和NIHSS评分(P<0.05),HALP+NIHSS评分曲线下面积为0.879(95%CI=0.849~0.910)。结论 HALP+NIHSS评分对LAA型脑梗死患者的预后有一定的预测价值。
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目的 构建MDCK-MDR1细胞体外吸收模型并进行验证,以用于口服药物吸收和转运机制的研究。方法 将不同浓度组(1.0×108/L的L组、2.5×108/L的M组、5.0×108/L的H组)MDCK-MDR1细胞接种于24孔Transwell培养板上,培养1~7 d,通过吸光度值绘制MDCK-MDR1细胞生长曲线,观察不同培养时间点细胞的形态,测定不同时间点的跨膜电阻(TEER)值,确定形成单层膜结构的最佳细胞接种浓度和培养时间。通过荧光黄转运实验对不同浓度和时间点形成的单细胞膜结构进行验证。结果 L组、M组和H组分别在接种后第5、3、1天形成单层膜结构,分别在第5、4、3天时吸光度值达到峰值。L组在接种第5天时TEER值达到300 Ω·cm2,第5~7天趋于稳定,故确定形成单层膜结构的最佳细胞接种浓度为1.0×108/L,最佳培养时间为5 d。荧光黄转运实验验证显示,该单层膜结构的荧光黄表观渗透系数为4.27×10-7 cm/s,低于通透性试验规定的5.0×10-7 cm/s。结论 本研究构建的MDCK-MDR1细胞模型单层膜结构完整性和通透性均通过验证,可作为模拟口服药物吸收和转运机制研究的体外模型。
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目的 探讨盆腔肿瘤患者同步放化疗对机体免疫功能、炎症状态和肠道微生态的影响。方法 收集2021年7月—2022年12月青岛市中心医院收治的60例盆腔肿瘤患者同步放化疗前后的血液和粪便样本,采用流式细胞术检测外周血淋巴细胞亚群、细胞因子水平,采用实时荧光定量PCR方法(RT-qPCR)检测粪便中具核梭杆菌、双歧杆菌、嗜酸乳杆菌和链球菌的数量,比较各项指标同步放化疗前后的变化,并与疗效进行相关性分析。结果 与治疗前相比,同步放化疗后盆腔肿瘤患者外周血CD3+CD8+细胞百分比、CD3-CD19+细胞百分比、IL-10水平显著降低(t=2.571~2.995,P<0.05),CD3+细胞百分比、CD3+CD4+细胞百分比、CD4+/CD8+比值及IL-1β、IL-2、IL-6、IFN-γ、TNF-α水平显著升高(t=-4.321~-2.638,P<0.05);粪便具核梭杆菌、双歧杆菌和嗜酸乳杆菌数量显著减少(t=3.128~3.954,P<0.05)。且治疗后外周血CD3+细胞百分比、CD3+CD4+细胞百分比、粪便双歧杆菌、嗜酸乳杆菌数量与疗效呈正相关(rs=0.440~0.540,P<0.05)。外周血IL-6、TNF-α水平及粪便具核梭杆菌数量与疗效呈负相关(rs=-0.685~-0.377,P<0.05)。结论 盆腔同步放化疗可激活机体抗肿瘤免疫功能,促进炎症反应发生,导致肠道致病菌和益生菌减少,造成肠道菌群紊乱。盆腔同步放化疗后外周血CD3+细胞百分比、CD4+细胞百分比,IL-6、TNF-α水平,粪便双歧杆菌、嗜酸乳杆菌和具核梭杆菌数量与疗效密切相关。
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目的 探讨中老年居民膳食模式与高尿酸血症(hyperuricemia,HUA)的关系。方法 于2009年1月—2012年12月采用分层抽样的方法选取青岛地区3 349例45~74岁的中老年人群,并对其进行问卷调查(人口学信息、个人疾病史、行为习惯、食物摄入情况等)、体格检查与生化指标检测等;采用因子分析法提取膳食模式,采用非条件Logistic回归分析膳食模式与HUA的关系,采用限制性立方样条模型分析膳食模式因子得分与HUA的剂量-反应关系。结果 因子分析得出内脏-禽肉-河鲜模式、蔬果-粮谷-豆类模式、蛋类-畜肉-奶类模式等3种膳食模式。非条件Logistics回归分析显示,在校正年龄、性别、BMI、饮酒、运动、高血压、血脂异常等混杂因素后,内脏-禽肉-河鲜模式T3水平与HUA患病风险呈正相关(OR=1.32,95%CI=1.02~1.70),蔬果-粮谷-豆类模式T3水平与HUA患病风险呈负相关(OR=0.74,95%CI=0.58~0.95),蛋类-畜肉-奶类模式与HUA患病风险无关。限制性立方样条模型显示,内脏-禽肉-河鲜模式和蛋类-畜肉-奶类模式与HUA患病率呈线性的剂量反应关系,蔬果-粮谷-豆类模式与HUA患病率呈现非线性的剂量反应关系。在蔬果-粮谷-豆类模式得分为0.833时,HUA患病风险最低(OR=0.72,95%CI=0.56~0.92)。结论 内脏-禽肉-河鲜模式与中老年人群HUA患病风险呈正相关,而蔬果-粮谷-豆类模式与中老年人群HUA的患病风险呈负相关,中老年人群尤其是HUA患者应合理均衡膳食。
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目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)核仁小分子RNA宿主基因1(SNHG1)对乳腺癌细胞迁移、侵袭和上皮-间质转化(EMT)的影响及其作用机制。方法 收集20例乳腺癌患者的癌组织与癌旁正常组织,培养人正常乳腺上皮细胞MCF-10A及乳腺癌细胞MCF-7、BT-549、MDA-MB-231和MDA-MB-468,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法检测组织和细胞中SNHG1与miR-641表达量。以BT-549细胞为研究对象,分为A~D组,分别转染si-NC(A组)、si-SNHG1(B组)、si-SNHG1+anti-miR-641-NC(C组)、si-SNHG1+anti-miR-641(D组),采用RT-qPCR检测细胞中SNHG1和miR-641表达量,采用Transwell实验检测细胞侵袭和迁移能力,用Western blot检测细胞EMT相关蛋白E-cadherin、N-cadherin和Vimentin表达量。将BT-549细胞分为E~H组,分别共转染SNHG1-WT与miR-641 mimics(E组)、SNHG1-WT与miR-NC(F组)、SNHG1-MUT与miR-641 mimics(G组)以及SNHG1-MUT与miR-NC(H组),采用双荧光素酶报告基因实验验证SNHG1和miR-641间是否存在互作。结果 SNHG1在乳腺癌组织中高表达(t=4.81,P<0.05),miR-641在乳腺癌组织中低表达(t=7.96,P<0.05)。与正常乳腺上皮细胞MCF-10A相比,4种乳腺癌细胞中SNHG1表达明显上调(t=8.11~10.79,P<0.05),而miR-641表达明显降低(t=9.16~11.17,P<0.05)。相较于A组,B组BT-549细胞的迁移及侵袭能力降低,N-cadherin和Vimentin蛋白表达量降低,E-cadherin蛋白和miR-641表达升高(t=3.95~19.45,P<0.05)。相较于C组,D组BT-549细胞迁移、侵袭能力增强,N-cadherin和Vimentin蛋白表达升高,E-cadherin蛋白表达降低(t=3.59~13.83,P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验结果显示,E组荧光素酶活性低于F组(t=8.37,P<0.05),G组与H组荧光素酶活性比较无统计学差异(P>0.05)。结论 SNHG1在乳腺癌组织和细胞中高表达,下调其表达可通过靶向miR-641抑制乳腺癌细胞迁移、侵袭及EMT过程。
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目的 探讨隐丹参酮(CPT)对HepG2细胞凋亡的影响及其机制。方法 采用MTT试验检测终浓度为0、1、5、10、20、40、100 μmol/L的CPT对HepG2细胞活性的影响,并计算出CPT对HepG2细胞的半数致死浓度(IC50)。将HepG2细胞分为A~D组,分别使用终浓度0、1、5、10 μmol/L的CPT培养48 h,分别通过划痕实验、JC-1染色和流式细胞术检测各组HepG2细胞的迁移能力、线粒体膜电位以及细胞凋亡率。将HepG2细胞分为E~H组,分别使用含有0 μmol/L CPT+20 μmol/L Spautin-1、1 μmol/L CPT+20 μmol/L Spautin-1、5 μmol/L CPT+20 μmol/L Spautin-1、10 μmol/L CPT+20 μmol/L Spautin-1的培养液培养。采用MTT实验检测E~H组处理48 h时的细胞活性,Western blot方法检测A、D、H组处理48 h时HepG2细胞中LC3B-Ⅱ蛋白的表达情况,JC-1染色检测A、D、E、H组处理48 h时的细胞线粒体膜电位,流式细胞术检测A、D、E、H组处理24 h时的细胞凋亡情况。结果 随着CPT浓度的递增,HepG2细胞活性明显下降,处理48 h时的IC50值为3.9 μmol/L。随着CPT浓度的升高,抑制HepG2细胞迁移的能力逐渐增强(t=5.96~29.63,P<0.05);绿色荧光与红色荧光比值也逐渐升高(t=4.24~23.36,P<0.05);HepG2细胞的细胞凋亡率逐渐增高(t=7.30~18.15,P<0.05)。A~H组间比较,细胞活性均有显著性差异(F=231.15,P<0.05),E~H与A~D组相比,细胞活性增高(t=3.96~18.80,P<0.05)。H组与D组相比,自噬相关蛋白LC3B-Ⅱ蛋白表达显著降低(t=3.52,P<0.05)。JC-1染色结果显示,E组、H组与D组比较绿色荧光与红色荧光比值均有显著差异(t=3.58、14.76,P<0.05)。流式细胞术检测细胞凋亡的结果显示,E组、H组与D组比较绿色荧光与红色荧光比值均有显著差异(t=12.38、4.99,P<0.05)。结论CPT可能通过诱导自噬从而促进HepG2细胞的凋亡,达到对HepG2细胞活性的抑制作用。
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目的 探讨鼻内镜辅助切除上颌骨囊肿的手术方法、临床效果及影响上颌骨囊肿临床症状的相关因素。方法 收集2018年5月—2022年5月我科收治的34例上颌骨囊肿患者的临床资料,分析鼻内镜辅助治疗上颌骨囊肿手术方法的选择情况及治疗的效果,同时收集患者术前和术后不同时间鼻面部不适程度视觉模拟评分(VAS),分析其影响因素。结果 6例患者行经鼻内镜鼻底开窗入路手术,2例患者行经鼻内镜上颌窦自然窦口入路手术,1例患者行经鼻内镜下鼻道开窗入路手术,25例患者行经鼻内镜上颌窦自然窦口入路联合泪前隐窝入路手术。术后随访5~24个月,术腔黏膜上皮化良好,症状明显缓解,囊腔引流通畅,病例无复发。上颌窦组患者术前VAS评分明显高于鼻底组(t=2.242,P<0.05);牙源性上颌骨囊肿组患者术前VAS评分明显高于非牙源性上颌骨囊肿组(t=2.329,P<0.05)。结论 鼻内镜下辅助治疗上颌骨囊肿,可以较为完整地切除病变并建立充分的引流通道,术后患者恢复快、并发症少、复发率低,值得临床推广应用。
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目的 探讨睑缘深部清洁联合强脉冲光(IPL)对蠕形螨睑缘炎患者的临床治疗效果。方法 选取2021年7月—2022年3月于深圳市眼科医院确诊为蠕形螨睑缘炎的患者60例(120眼),根据治疗方式不同将患者分为睑缘深部清洁组(A组,60眼)及联合IPL组(B组,60眼)。比较每组患者治疗前及治疗2个月后的眼表疾病指数(OSDI)评分、睑缘炎症评分、睑板腺开口评分、睑板腺分泌物评分、睑板腺缺失评分及睑缘蠕形螨计数等指标及其治疗前后差值。结果 治疗2个月后,两组患者的OSDI评分、睑缘炎症评分、睑板腺开口评分、睑板腺分泌物评分和蠕形螨计数均较治疗前明显下降(t=6.880~15.959,P<0.05),而睑板腺缺失程度评分较前均无明显差异(P>0.05);两组患者的OSDI评分、睑缘炎症评分、睑板腺开口评分、睑板腺分泌物评分和蠕形螨计数治疗前后差值比较差异具有显著性(t=2.047~5.685,P<0.05),睑板腺缺失程度评分差值比较差异无显著性(P>0.05)。结论 睑缘深部清洁联合IPL治疗能够减轻患者眼部不适感,改善睑板腺分泌状况,减少睑缘蠕形螨数量,从而有效治疗蠕形螨睑缘炎。
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目的 探讨EB病毒相关性淋巴上皮瘤样肝内胆管细胞癌(EBVaLELICC)的病理学特征,以加深临床对该肿瘤的认识。方法 收集1例EBVaLELICC患者的临床及病理学资料,对其病理石蜡标本进行免疫组化、原位杂交和基因重排检测,分析该病病理学特点,并复习相关文献。结果 患者女,56岁,肿瘤位于肝左外叶,边界清楚,约1.8 cm×1.5 cm×1.2 cm大小。于肝胆外科行腹腔镜下肝左外叶切除术,术后病理学检查示肿瘤细胞呈腺管状,部分不规则、融合或呈筛状,细胞呈合体状,核大、染色质细,可见小核仁,未见核分裂象;间质大量淋巴细胞、浆细胞增生,伴淋巴滤泡形成。免疫组化染色示肿瘤细胞表达CK7、CK19,P53表达率为10%,表现为野生型,Ki-67增殖指数5%,间质淋巴细胞表达CD3、CD4、CD8、CD20,淋巴滤泡生发中心细胞表达BCL-6、CD10,不表达BCL-2,浆细胞表达CD38、Kappa、Lambda,PD-L1(22C3)在肿瘤细胞及间质淋巴细胞均有表达,联合阳性分数值约为30。EBER原位杂交检测示肿瘤细胞弥漫阳性。淋巴细胞免疫球蛋白及T细胞受体基因均呈多克隆重排。患者术前及术后均未接受任何治疗,随访8个月健在,未发现肿瘤复发转移。结论 EBVaLELICC是一种罕见的胆管癌亚型,具有独特的病理学特征,患者可从免疫治疗中获益,预后好于普通型胆管细胞癌。
