目的 探究磷酸弗林酸性簇分选蛋白2(PACS-2)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌肥大的影响及其机制。方法 剪取并消化出生1~2 d的SD大鼠乳鼠的心脏组织,采用差速贴壁法获取乳鼠心肌细胞(NRCMs),原代培养24 h。以浓度为1.5 μmol/L的AngⅡ处理NRCMs 0、3、6、12、24 h,采用Western blot方法检测细胞中FUN14域蛋白1(FUNDC1)、PACS-2、三磷酸肌醇受体蛋白(IP3R)的表达水平,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法检测细胞中心钠肽(ANP)、脑钠肽(BNP)、β-肌球蛋白重链(β-MHC)mRNA的表达水平。将NRCMs分为A~C组,A组使用无血清培养基培养,B、C组分别转染si-NC和si-PACS-2,采用Western blot方法检测各组细胞中PACS-2蛋白的表达水平。将NRCMs分为D~G组,D组使用无血清培养基培养,E组以浓度0.15 μmol/L的AngⅡ培养,F、G组分别转染si-NC、si-PACS-2后再以浓度0.15 μmol/L的AngⅡ培养,采用TRITC-鬼笔环肽染色技术检测各组心肌细胞表面积,RT-qPCR检测各组细胞ANP、BNP、β-MHC mRNA的表达水平,以Fluo-4,AM探针检测各组细胞胞质Ca²⁺的水平。将NRCMs分为H~K组,H组使用无血清培养基培养,I、J组分别转染si-NC、si-PACS-2,K组转染si-PACS-2并且以浓度1 μmol/L的钙调蛋白(CaM)拮抗剂处理后,采用RT-qPCR方法检测各组细胞ANP、BNP、β-MHC mRNA的表达水平。结果 以浓度1.5 μmol/L的AngⅡ处理NRCMs 0、3、6、12、24 h,NRCMs中ANP、BNP、β-MHC mRNA的表达水平呈时间依赖性上调(F=25.73~58.30,P<0.05),并且处理第24小时时相较于第0小时时均显著上调(t=5.35~37.50,P<0.05)。以浓度1.5 μmol/L的AngⅡ处理NRCMs 0、3、6、12、24 h,NRCMs中IP3R、PACS-2以及FUNDC1蛋白的表达水平均呈时间依赖性下调(F=5.37~9.07,P<0.05),并且处理第24小时时相较于第0小时时显著下调(t=6.55~7.42,P<0.05)。与B组相比,C组NRCMs中PACS-2蛋白的表达水平显著下调(t=5.92,P<0.05)。与F组相比,G组NRCMs中心肌细胞表面积增大,ANP、BNP、β-MHC mRNA的表达水平及胞质Ca²⁺水平均上调(t=3.50~26.60,P<0.05)。与J组相比,K组NRCMs中ANP、BNP、β-MHC mRNA表达水平均显著下调(t=3.27~5.13,P<0.05)。结论 敲低PACS-2可增加NRCMs中胞质Ca²⁺水平,并且可能以Ca²⁺-CaM依赖的方式加重AngⅡ诱导的心肌肥大的发生。

目的 评估冷圈套器息肉切除术(CSP)与热圈套器息肉切除术(HSP)治疗直径10~15 mm结直肠息肉的有效性和安全性。方法 收集2022年6月—2023年2月于青岛大学附属医院崂山院区消化内科行结肠镜检查并拟行息肉切除(至少有1枚结直肠息肉的最大直径为10~15 mm)的患者138例,随机分为CSP组76例,HSP组62例,对两组患者息肉切除的有效性指标(息肉完全切除比例、整块切除比例)及安全性指标(术中出血、迟发出血、术中穿孔、迟发穿孔、术后反应性结肠浆膜炎发生比例)进行比较。结果 HSP组息肉完全切除比例为98.4%,整块切除比例为96.8%;CSP组息肉完全切除比例为97.3%,整块切除比例为98.7%,两组患者的上述有效性指标比较差异均无显著性(P>0.05)。CSP组中2例患者发生术中出血,无迟发出血、术中和迟发穿孔和反应性结肠浆膜炎发生,有71例患者使用钛夹,共使用82枚;HSP组中1例患者发生术中出血,2例患者发生迟发出血,无术中和迟发穿孔发生,4例患者发生反应性结肠浆膜炎,有61例患者使用钛夹,共使用72枚,两组患者的上述安全性指标比较差异均无显著性(P>0.05)。结论 CSP用于切除直径10~15 mm结直肠息肉安全、有效,推荐临床选择应用。

目的 探讨miR-429对乳腺癌细胞增殖和迁移的影响及其机制。方法 采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和免疫印迹法,分别检测乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-468、BT-549细胞及正常乳腺上皮细胞MCF-10A的eIF4E mRNA和蛋白相对表达量。在MCF-7细胞中转染miR-429 mimics(A组)、mimics NC(B组)、miR-429 inhibitors(C组)及inhibitors NC(D组),采用RT-qPCR法、CCK8法、细胞划痕实验和免疫印迹法检测A~D组细胞miR-429表达情况、细胞增殖和迁移情况、eIF4E mRNA和蛋白相对表达量。在293T细胞中转染eIF4E-3'UTR-Wt+miR-429 mimics(E组)、eIF4E-3'UTR-Wt+mimics NC(F组)、eIF4E-3'UTR-Mut+miR-429 mimics(G组)、eIF4E-3'UTR-Mut+mimics NC(H组),检测E~H组细胞相对荧光素酶活性,分析miR-429对eIF4E的靶向调控作用。结果 RT-qPCR与免疫印迹检测结果显示,MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-468、BT-549细胞中的eIF4E mRNA以及蛋白的相对表达量均明显高于正常乳腺上皮细胞MCF-10A(F=74.414、1 981.243,P<0.01)。RT-qPCR法检测结果显示,A组细胞的miR-429相对表达量明显高于B组(t=25.390,P<0.01),而eIF4E mRNA相对表达量明显低于B组(t=-6.363,P<0.05),C组细胞miR-429相对表达量明显低于D组(t=-4.652,P<0.05),而eIF4E mRNA相对表达量明显高于B组(t=-2.928,P<0.05)。CCK8实验检测结果显示,与B组细胞相比,A组细胞第24、48、72小时时的增殖活力明显降低(F=26.148~40.997,P<0.01);与D组细胞相比,C组细胞第24、48、72小时增殖活力明显增高(F=6.410~82.593,P<0.05)。细胞划痕实验显示,A组细胞愈合率明显低于B组(t=-22.584,P<0.01),C组细胞愈合率明显高于D组(t=11.464,P<0.01)。免疫印迹法检测结果显示,A组细胞中eIF4E蛋白相对表达量明显低于B组(t=-20.355,P<0.01),C组细胞eIF4E蛋白相对表达量明显高于D组(t=3.622,P<0.01)。双荧光素酶报告基因实验结果显示,各组细胞相对荧光素酶活性比较差异具有显著性(F=366.823,P<0.05),而且E组细胞相对荧光素酶活性显著低于F组(t=-42.961,P<0.01)。结论 miR-429或通过靶向调控eIF4E基因进而抑制乳腺癌细胞的增殖和迁移。

目的 探讨终末期肝病模型(MELD)-甲胎蛋白(AFP)联合评分等对慢加急性肝衰竭(acute-on-chronic liver failure,ACLF)患者预后的预测价值,并分析该病患者预后的影响因素。方法 回顾性分析2015年9月—2021年9月青岛大学附属医院和青岛市第六人民医院收治的ACLF患者的临床资料,根据确诊第90天时预后情况分为存活组和死亡组,分析ACLF患者预后的影响因素,并分析血清AFP、MELD评分及MELD-AFP联合评分在患者短期预后预测方面的效能。结果 共纳入159例ACLF患者,确诊第28天时存活患者129例,死亡患者30例;确诊第90天时存活患者111例,死亡患者48例。血清AFP水平、乳酸脱氢酶水平、红细胞计数、血红蛋白水平、谷丙转氨酶/谷草转氨酶(谷丙/谷草)比值、尿素氮/肌酐比值、MELD评分是影响ACLF患者确诊第90天时预后的独立因素。与MELD评分相比,MELD-AFP评分对ACLF患者确诊第90天时的存活情况预测效能更好(AUC=0.81)。结论 血清乳酸脱氢酶水平、尿素氮/肌酐比值、谷丙/谷草比值、红细胞计数、血清AFP水平、血清血红蛋白水平升高与ACLF患者确诊后第90天时的预后情况密切相关。MELD-AFP联合评分能够明显优化传统MELD评分在ACLF患者短期预后方面的预测效能。

目的 探讨局部进展期胃上部癌患者新辅助化疗(NACT)前后炎症营养指标与NACT疗效的关系,并建立临床预测模型。方法 选取2013年4月—2022年1月于我院胃肠外科接受NACT的胃上部癌患者117例,根据化疗结果分为有效组与无效组,收集患者的年龄、性别、吸烟史、饮酒史、首发症状、肿瘤部位、肿瘤分化程度、肿瘤临床分期、肿瘤病理类型、NACT前1周内及NACT后1周内的血常规结果等临床资料,经单因素及多因素分析后筛选出影响NACT疗效的因素,进一步构建列线图模型并验证该模型的性能。结果 多因素分析结果显示,患者NACT前后的血浆中性粒细胞与淋巴细胞比值(NLR)差值(△NLR)(OR=2.043,95%CI=1.334~3.127,P<0.05)、血浆血小板与淋巴细胞比值(PLR)差值(△PLR)(OR=1.007,95%CI=1.000~1.014,P<0.05)、血清白蛋白(Alb)差值(△Alb)(OR=0.936,95%CI=0.878~0.997,P<0.05)以及T分期(OR=4.044,95%CI=1.128~14.501,P<0.05)均为影响NACT疗效的独立危险因素。基于多因素分析结果构建胃上部癌NACT疗效列线图预测模型,该模型受试者特征曲线下面积为0.877,绘制的校准曲线及临床决策曲线显示校准度较好且与实际结果较一致。结论 胃上部癌患者△NLR、△PLR、△Alb及T分期为影响NACT疗效的独立危险因素,胃上部癌NACT疗效预测模型具有良好的预测性能和临床应用价值。

目的 建立基于膝关节MRI单张图像的深度卷积神经网络(DCNN)模型,并分析其诊断前交叉韧带(ACL)撕裂的价值。方法 收集2017年1月1日—2022年6月30日海军第971医院GreatPACS影像存档与通信系统中1 663例受检者的膝关节MRI图像,经一名骨科专科医生在每例患者MRI图像中手动选取1张图像并进行ACL正常或撕裂(正常1 111张,撕裂552张)标注。将所有图像按照83%和17%的比例随机分配到训练集(1 383张)和测试集(280张)中,用以训练并测试搭建的ACL智能诊断DCNN模型。通过阳性预测值(PPV)、阴性预测值(NPV)、准确率、灵敏度、特异度、受试者工作特征曲线下面积(AUC)等指标评估模型性能。结果 本研究成功设计并搭建了ACL智能诊断DCNN模型。该模型诊断ACL撕裂的PPV、NPV、准确率、灵敏度和特异度分别为52.99%、88.96%、73.93%、77.50%和72.50%,AUC值为0.602。结论 基于MRI单张图像DCNN模型对于临床医生诊断ACL撕裂具有一定的辅助作用。

目的 探讨高剂量阿托伐他汀对肝损伤小鼠胆汁酸代谢的影响及其机制。方法 选取SPF级雄性C57BL/6小鼠40只,随机分为生理盐水组(A组)及阿托伐他汀低、中、高剂量组(B、C、D组),每组10只。分别用生理盐水及10、20、30 mg/kg阿托伐他汀灌胃30 d后,取各组小鼠眼眶血,比较各组小鼠血清总胆汁酸(TBA)、内毒素(ET)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)表达水平;取各组小鼠部分肝脏组织,HE染色后观察肝脏组织病理变化情况,并采用PCR方法检测肝组织中胆汁酸代谢相关基因尼酯衍生物X受体(FXR)基因及多药耐药相关蛋白2(MRP2)基因的表达。结果 D组小鼠肝组织可见轻微肿大样改变、散在炎症细胞浸润和羽毛样变性情况。与其他组相比,D组小鼠血清TBA、ET、AST、ALT水平均显著升高(P<0.05);与A组相比,C、D组小鼠肝组织中FXR、MRP2基因相对表达量显著降低(P<0.05);与B组相比,D组小鼠肝组织中FXR、MRP2基因相对表达量显著降低(P<0.05)。结论 阿托伐他汀可诱导小鼠血清TBA水平升高,并且导致肝组织中胆汁酸代谢下游相关基因FXR、MRP2表达改变,大剂量给药导致的肝组织胆汁酸代谢异常可能是阿托伐他汀肝脏毒性的主要原因之一。

目的 制备小鼠Lewis肺癌(Lewis lung carcinoma,LLC)全细胞疫苗,并探讨该疫苗在提高C57BL/6小鼠免疫系统对抗LLC方面的作用。方法 利用TCGA数据库分析MYC扩增背景下人类肺腺癌(lung adenocarcinoma,LUAD)组织内免疫细胞浸润丰度的变化特点,探讨确定制备LLC全细胞疫苗时紫外线照射的最佳时长。利用小鼠模型,评估靶向抑制Myc的LLC全细胞疫苗在抵抗LLC方面的效果。结果 在人LUAD组织样本中,相较于N-MYC低表达组,N-MYC高表达组的激活CD4⁺记忆T细胞与激活NK细胞浸润丰度显著降低(W=28 233、27 990,P<0.05),Tregs细胞浸润丰度显著升高(W=36 074,P<0.05)。抑制剂处理过的小鼠LLC细胞在经过15 min的紫外线照射后完全失去活性,并且LLC细胞内的c-Myc、N-Myc和PD-L1表达量显著降低(t=6.26~13.51,P<0.05)。在小鼠模型实验中,与Irra组相比,Irra处理组中的小鼠表现出肿瘤生长速度减缓和生存期延长的现象。此外,Irra处理组小鼠的脾脏和肿瘤内CD3⁺CD8⁺/CD3⁺T细胞比值以及血清中的细胞因子TNF-α和IFN-γ表达水平也显著增加(F=54.83~381.10,P<0.05)。结论 本研究成功制备了LLC全细胞疫苗。在小鼠实验中,接种靶向抑制Myc的LLC全细胞疫苗能够提高免疫系统对LLC的攻击能力,抑制肿瘤细胞的生长速度,延长小鼠生存期。

目的 探究髓核样尿源干细胞(NP-USC)分化程度与分化时间的关系,以及人尿源干细胞外泌体(USC-EXO)对NP-USC增殖及分化的影响。方法 提取、鉴定并共培养髓核细胞(NPC)和尿源干细胞(USC)。根据共培养时间不同将细胞进行分组,A组:共培养7 d后,将NP-USC于无外泌体USC培养基中培养14 d;B组:共培养14 d后,将NP-USC于无外泌体USC培养基中培养7 d;C组:共培养21 d;另设USC组(USC单独培养21 d)和NPC组(NPC单独培养21 d)。使用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)及Western blot方法检测5组细胞缺氧诱导因子(HIF-1α)、葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)、Ⅱ型胶原蛋白(COL2)、蛋白多糖(ACAN)mRNA及蛋白质的表达情况。另将上述5组细胞用无外泌体USC培养基培养28 d,于第7、14、21、28天时采用CCK-8法检测细胞增殖情况。结果 RT-qPCR及Western blot方法检测结果显示,USC、A、B、C组中HIF-1α、GLUT1、COL2、ACAN mRNA及蛋白的相对表达量分别依次升高(t=53.36~371.86,P<0.01),但C组与NPC组4种基因及蛋白相对表达量无显著差异(P>0.05);加入USC-EXO前后,5组细胞中4种基因相对表达量无显著差异(P>0.05)。CCK-8法检测结果显示,在各时间点,USC、A、B、C组细胞活力依次下降(F=3.77~103.58,P<0.05),但C组与NPC组无显著差异(P>0.05)。5组细胞中每组均随着培养时间的延长细胞活力逐渐升高(F=9.96~121.68,P<0.05)。结论 NPC诱导USC时间越长,所形成的NP-USC分化程度越高、增殖速率越低。USC-EXO具有促NP-USC增殖的能力,但其不具有促分化的能力;NP-USC分化程度越高,USC-EXO的促增殖能力越低。

目的 探讨基于μ阿片受体(MOR)羧基端³⁷⁵STANT³⁷⁹磷酸化位点的多肽TAT-Q368-T379干预,对μ阿片受体下游信号通路的影响。方法 将HA-MOR质粒与pGloSensorTM-22F质粒共转染的HEK-293细胞分为空白组(A组)、DAMGO组(B组)、吗啡组(C组)、0.5×10^-5 mol/L多肽TAT-Q368-T379与吗啡联用组(D组)、10^-5 mol/L多肽TAT-Q368-T379与吗啡联用组(E组)、2×10^-5 mol/L多肽TAT-Q368-T379与吗啡联用组(F组),通过GloSensor cAMP生物传感器测定各组细胞中的cAMP含量。将MOR-C端标记Nanoluc的质粒以及β-arrestin2-N端标记EYFP的质粒共转染完成的HEK-293细胞分为空白组(G组)、DAMGO组(H组)、吗啡组(I组)、10^-5 mol/L多肽TAT-Q368-T379与吗啡联用组(J组)、3×10^-5 mol/L Cmpd101与吗啡联用组(K组),通过蛋白质相互作用分析法测定各组细胞MOR激动后对β-arrestin2的募集效应。将HA-MOR质粒转染完成的HEK-293细胞分为空白组(L组)、吗啡组(M组)、10^-5 mol/L多肽TAT-Q368-T379与吗啡联用组(N组)以及3×10^-5 mol/L Cmpd101与吗啡联用组(O组),通过细胞免疫荧光染色法检测各组细胞的受体平均荧光强度。结果 GloSensor cAMP生物传感器检测结果显示,C~F组细胞EC₅₀值差异有显著性(F=13.12,P<0.05),其中D、E、F组EC₅₀值较C组均显著减小(P<0.05)。蛋白质相互作用分析法分析显示,I~K组细胞E_max值差异有显著性(F=185.95,P<0.05),其中J、K组E_max值较I组均显著减小(P<0.01)。细胞免疫荧光染色法染色结果显示,L~O组细胞表面受体荧光强度比较差异有显著性(F=17.46,P<0.05),其中与M组比较,N、O组细胞表面受体荧光强度均显著增高(P<0.01)。结论 基于MOR羧基端³⁷⁵STANT³⁷⁹磷酸化位点设计的多肽TAT-Q368-T379可有效增强吗啡介导的MOR下游G蛋白信号通路的激活,减少吗啡介导的β-arrestin2招募,从而减少由吗啡介导的MOR的内吞。

目的 探讨瑞马唑仑对脑缺血再灌注损伤模型大鼠脑神经的保护作用及其机制。方法 将50只雄性SD大鼠随机分为5组,分别为假手术(Sham)组、脑缺血再灌注(I/R)组、I/R+瑞马唑仑(I/R+RE组)组、I/R+RE+LY294002(I/R+RE+LY)组及I/R+LY组。采用神经功能缺损评分评估各组大鼠的神经功能障碍程度,随后获取各组大鼠动脉血及脑组织病理切片,使用2,3,5-氯化三苯基四氮唑对脑组织切片染色并计算各组大鼠的脑梗死体积比,采用酶联免疫吸附试验检测各组大鼠血清白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,采用免疫印迹实验检测各组大鼠脑组织中蛋白激酶B(AKT)、磷酸化AKT(p-AKT)、核因子κ-活化B细胞轻链增强子p65(NF-κB p65)和磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)的相对表达量,再使用免疫荧光法检测各组大鼠脑组织细胞核内、外p-NF-κB p65的表达。结果 各组大鼠的脑梗死体积比、神经功能缺损评分,血清IL-6、IL-1β、TNF-α水平,p-AKT、p-NF-κB p65相对表达量以及p-AKT/AKT、p-NF-κB p65/NF-κB p65比值比较,差异均有显著性(F=72.41~654.90,P<0.05)。其中,与Sham组相比,I/R组大鼠的脑梗死体积比、神经功能缺损评分,血清IL-6、IL-1β、TNF-α水平,脑组织p-NF-κB p65相对表达量及p-NF-κB p65/NF-κB p65比值均显著增高(P<0.05);脑组织p-AKT相对表达量、p-AKT/AKT比值显著下降(P<0.05);免疫荧光法显示大鼠脑组织中p-NF-κB p65细胞核易位增多。与I/R组、I/R+RE+LY组和I/R+LY组相比,I/R+RE组大鼠的脑梗死体积比、神经功能缺损评分,血清IL-6、IL-1β、TNF-α水平,脑组织p-NF-κB p65相对表达量和p-NF-κB p65/NF-κB p65比值均显著下降(P<0.05);脑组织p-AKT相对表达量和p-AKT/AKT比值显著增高(P<0.05);免疫荧光法显示脑组织中p-NF-κB p65细胞核易位减少。结论 瑞马唑仑可减轻脑I/R损伤引起的炎症反应,发挥脑神经保护的作用,其保护机制与其对AKT/NF-κB信号通路的调控有关。

目的 通过代谢组学和转录组学联合分析方法筛选丙泊酚致神经毒性的关键基因。方法 以0、25、50、75、100 mg/L的丙泊酚培养HT22细胞(分别为Ctrl组、P25组、P50组、P75组、P100组)24 h,采用CCK-8实验检测各组细胞的活性。收集各组处理24 h后HT22细胞提取RNA和代谢物,进行代谢物检测和转录组分析。对提取的各组HT22细胞代谢物进行液相色谱-质谱(LC-MS)分析、差异代谢物分析、趋势分析,筛选出关键代谢物。对提取的各组HT22细胞RNA进行测序序列比对分析、差异基因分析,筛选出差异基因。对上述筛选出的关键代谢物和差异基因进行加权基因共表达分析(WGCNA)和蛋白质相互作用网络(PPI)分析,获得丙泊酚致神经毒性的关键基因。结果 各组HT22细胞的细胞活性随丙泊酚浓度的升高而下降(t=11.40~97.25,P<0.05)。对提取的各组HT22细胞代谢物进行LC-MS分析,共检测到2 701种代谢物,进一步经差异分析和趋势分析,得到49种关键代谢物。对提取的各组HT22细胞RNA进行序列比对分析,各组HT22细胞的测序序列数量能够满足数据分析需要,Ctrl组与P25组、P50组、P75组、P100组间的差异基因分别为1 254、4 695、4 923和5 031个。对关键代谢物以及差异基因进行WGCNA分析和PPI分析,共筛选出了15种关键基因,分别为NTNG2、ENG、SEMA4G、JAG2、FGF11、SERPINE1、GDF15、GADD45G、F3、NGF、FGF21、PGF、EGFL7、SEMA6D、LRFN1。结论 丙泊酚所导致的神经毒性的关键基因可能包含NTNG2、ENG、SEMA4G、JAG2、FGF11、SERPINE1、GDF15、GADD45G、F3、NGF、FGF21、PGF、EGFL7、SEMA6D以及LRFN1。筛选出的这些基因为后续丙泊酚致神经毒性的分子机制研究提供了理论基础,同时也为丙泊酚的神经毒性预防用药和治疗用药的开发提供了研究方向。

目的 探讨普罗布考抑制巨噬细胞M1极化对ApoE^-/-小鼠动脉粥样硬化进展的影响及其机制。方法 20只ApoE^-/-小鼠随机分为对照组和普罗布考组。两组均给予高脂饲料喂养,普罗布考组隔日1次以普罗布考灌胃,对照组以等剂量生理盐水灌胃,干预12周后分别麻醉后心尖取血,然后颈椎脱臼法处死小鼠留取主动脉血管,利用生化仪检测小鼠血脂、肝肾功能情况;ELISA法检测小鼠血清中炎性因子(IL-1β、IL-6和TNF-α)水平;对主动脉进行整体油红O染色,检测动脉粥样硬化斑块面积;取主动脉根部行冰冻切片,通过油红O染色检测斑块面积和脂质沉积情况,采用Masson染色检测斑块稳定性,以组织免疫荧光法检测斑块巨噬细胞、平滑肌细胞、胶原纤维及巨噬细胞M1极化情况,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法检测两组小鼠主动脉斑块中炎性因子mRNA的水平。提取C57BL/6J小鼠腹腔原代巨噬细胞,分为两组,对照组给予脂多糖(LPS)联合干扰素-γ(IFN-γ)处理,普罗布考组在对照组基础上给予普罗布考处理,通过ELISA和RT-qPCR方法检测炎性因子(IL-1β、IL-6和TNF-α)、巨噬细胞M1极化标志物(iNOS、CD86)mRNA的水平。结果 与对照组相比,普罗布考组ApoE^-/-小鼠血清中三酰甘油、总胆固醇及低密度脂蛋白水平改善(t=2.445~4.024,P<0.05),主动脉血管斑块面积减小(t=3.599、2.954,P<0.05);同时,普罗布考组主动脉根部斑块中脂质沉积减少,平滑肌和胶原纤维含量增多,巨噬细胞及其M1极化标志物明显减少。普罗布考组和对照组相比,小鼠血清以及主动脉根部斑块中炎性因子IL-1β、IL-6和TNF-α水平降低(t=2.388~4.891,P<0.05)。同时与对照组相比,普罗布考组小鼠腹腔原代巨噬细胞中炎性因子IL-1β、IL-6和TNF-α水平降低(t=4.238~9.580,P<0.05),CD86、iNOS mRNA水平明显降低(t=3.251、20.860,P<0.05)。结论 普罗布考可延缓小鼠主动脉粥样硬化进展并促进斑块稳定,其机制可能与抑制主动脉巨噬细胞M1极化、减轻斑块炎症反应有关。

目的 探讨核糖体合成调控因子1(RRS1)基因对乳腺癌BT549细胞增殖和迁移的影响及其作用机制。方法 通过Western Blot实验检测人乳腺癌细胞系(MDA-MB-231、MDA-MB-468、BT549、MCF-7细胞)和人正常乳腺上皮MCF-10A细胞RRS1蛋白的表达量。通过免疫荧光检测RRS1在BT549细胞中的定位。慢病毒感染法建立RRS1敲低的BT549细胞系,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western Blot实验检测感染阴性对照慢病毒细胞(Con组)和感染shRNA-RRS1慢病毒细胞(sh-RRS1组)中RRS1 mRNA和蛋白相对表达量。采用CCK8实验和集落形成实验检测RRS1对BT549细胞增殖能力的影响,通过细胞划痕实验、Transwell实验检测RRS1对BT549细胞迁移能力的影响。采用Western Blot实验检测两组细胞AKT-mTOR相关信号通路蛋白及其下游缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)蛋白、血管内皮生长因子(VEGF)蛋白相对表达量。结果 MDA-MB-231、MDA-MB-468、BT549、MCF-7乳腺癌细胞系中RRS1相对表达量与人正常乳腺上皮MCF-10A细胞相比均显著增高(F=48.92,P<0.05)。免疫荧光染色显示,RRS1主要在BT549细胞的细胞核和核仁表达,细胞质也有少量表达。与Con组进行比较,sh-RRS1组RRS1 mRNA和蛋白表达量显著降低,增殖和迁移能力均明显减弱,p-AKT、p-mTOR、HIF-1α、VEGF蛋白表达量均显著降低(t=6.29~32.04,F=1 368.00、2 699.00,P<0.05)。结论 RRS1可能通过AKT-mTOR 通路促进乳腺癌细胞的增殖和迁移。

目的 探讨四君子汤治疗酒精性肝损伤的效果及其机制。方法 将雄性C57BL/6小鼠随机分为正常组(A组)、酒精模型组(B组)、四君子汤低剂量组(C组)及四君子汤高剂量组(D组),B~D组小鼠每天灌胃体积分数0.56的乙醇溶液(6 g/kg),A组小鼠每天灌胃等剂量的生理盐水;同时C、D组小鼠再分别每天灌胃5、10 g/kg的四君子汤,每5 d测1次小鼠体质量,实验持续18 d。灌胃结束后,采集小鼠新鲜粪便进行16S rDNA基因测序分析小鼠肠道菌群的变化;麻醉后,眼眦取血,收集血清进行肠道通透性检测;收集小鼠血液和肝脏、脾脏组织样本,测定各组小鼠的肝、脾指数以及血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆红素(T-BIL)、碱性磷酸酶(ALP)、三酰甘油(TG)和总胆固醇(TC)的含量,利用苏木精-伊红(HE)和油红O染色观察各组小鼠肝、脾组织形态学变化。结果 D组与B组相比,小鼠体质量及肝指数、脾指数差异有显著性(t=3.53~4.41,P<0.05),血清中ALP、T-BIL、TG水平显著降低(t=3.51~5.60,P<0.05);C、D组与B组相比,小鼠血清中ALT、AST、TC水平显著下降(t=2.19~7.62,P<0.05)。病理结果显示C、D组与B组比较,肝组织中肝索形态恢复正常,肝脏脂肪蓄积减轻;脾组织中红髓白髓分界清晰。肠道通透性结果显示,D组与B组比较,肠道通透性显著降低(t=3.19,P<0.05);肠道菌群检测结果显示,C、D组较B组,小鼠肠道菌群多样性增加,Dubosiella、Bifidobacterium、Allobaculum等有益菌含量增多,Prevotellaceae_UCG-001、Alloprevotella等致病菌含量降低。结论 四君子汤可有效改善酒精诱导的小鼠肝损伤,其机制可能是通过调节肠道菌群变化实现的。

目的 观察心脏细胞外基质(c-ECM)结合胶原靶向血管内皮生长因子(CBD-VEGF)和Ang-1模拟肽(AMP)对心肌梗死大鼠心脏功能的影响。方法 对AMP行MTT体外人脐静脉内皮细胞(HUVEC)活性试验及对修饰了Biotin的AMP(Bio-AMP)进行与c-ECM的结合试验。将SD大鼠行左前降支结扎构建心肌梗死模型,然后随机分为PBS组(A组)、c-ECM/CBD-VEGF组(B组)和CBD-VEGF/c-ECM/AMP组(C组),每组4只,分别于梗死部位注射PBS、CBD-VEGF/c-ECM和CBD-VEGF/c-ECM/AMP进行治疗。3个月后采用超声心动图评价3组大鼠的心脏功能,采用免疫荧光染色方法检测3组大鼠心肌梗死区域血管数量、vWF阳性面积比和ZO1阳性面积比。结果 MTT试验检测结果显示,AMP和Ang-1具有相似的促进HUVEC增殖的能力;结合实验结果显示,Bio-AMP可以连接在c-ECM上。处理3个月后,C组大鼠术后心脏射血分数(EF)显著高于A组和B组(t=7.794、3.613,P<0.05)。大鼠心肌梗死区域免疫荧光染色显示,C组血管数量和vWF阳性面积比高于A组(t=4.950、22.390,P<0.05),并且C组vWF阳性面积比显著高于B组(t=11.400,P<0.05)。C组和B组的ZO1阳性面积比明显高于A组(t=13.290、4.328,P<0.05),C组的ZO1阳性面积比明显高于B组(t=8.243,P<0.05)。结论 将本研究合成的CBD-VEGF/c-ECM/AMP水凝胶注射于大鼠心肌梗死区域后具有促进大鼠心脏功能恢复和促进心肌梗死后血管再生及细胞连接的作用。

目的 探讨松油烯-4-醇(T4O)和α-红没药醇(Bis)对于金黄色葡萄球菌(S.aureus)和痤疮丙酸杆菌(C.acnes)的协同抑菌作用。方法 采用微量棋盘稀释法测定T4O、Bis联用时上述两种实验菌的最小抑菌浓度(MIC),并计算部分抑菌浓度指数(FICI)。对两种实验菌各设置MIC组(加入MIC的T4O、Bis)、2×MIC组(加入2倍MIC的T4O、Bis)及阴性对照组(不加T4O、Bis),绘制T4O、Bis联用时两种实验菌各组的时间-杀菌曲线,测定联用时两种实验菌各组的菌株表面Zeta电位(ZP)、细胞内核酸及蛋白质泄漏情况、细菌生物膜破坏情况以及S.aureus的呼吸链脱氢酶活性,透射电镜观察联用对两种实验菌各组菌株形态的影响。结果 T4O和Bis联用时S.aureus及C.acnes的FICI<0.5,其中T4O对S.aureus的MIC为0.62 g/L,对C.acnes的MIC为0.31 g/L;时间-杀菌曲线显示,联用可明显抑制两种细菌生长。与阴性对照组相比,联用时两种细菌的ZP均降低,细菌细胞内核酸、蛋白质泄漏增加,菌体丧失正常形态,细菌生物膜被破坏,且S.aureus呼吸链脱氢酶活力降低。结论 T4O和Bis对S.aureus及C.acnes具有协同抑菌作用,两者联合可能成为抑菌产品的有效成分。

目的 探讨TMEM106B参与阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)发病的可能机制。方法 从阿尔茨海默病神经影像学计划(ADNI)研究队列纳入接受TMEM106B rs1990622基因分型和AD脑脊液(CSF)核心蛋白、神经影像学评估的受试者308名,根据CSF β淀粉样蛋白42(Aβ_1-42)水平将其分为AD病理组和非AD病理组。收集患者的年龄、性别、受教育年限、基因型、AD CSF核心蛋白[包括Aβ_1-42、总tau蛋白(T-tau)和磷酸化tau蛋白(P-tau)]水平及神经影像学指标[包括海马、内嗅皮质及颞叶内侧MRI结果及氟脱氧葡萄糖正电子发射计算机断层扫描(FDG-PET)标准摄入值(SUV)]。采用卡方检验或t检验比较两组受试者上述指标,并采用多因素线性模型分析TMEM106B rs1990622位点多态性与AD关键表型的关联性。结果 两两比较结果显示,AD病理组及非AD病理组受试者的Aβ_1-42、T-tau、P-tau水平及载脂蛋白E ɛ4携带状态、FDG-PET SUV、各脑区(海马、内侧颞叶和内嗅皮质)体积比较差异有显著性(t=-6.137~50.792,P<0.05)。多因素线性模型分析结果显示,AD病理组女性受试者的TMEM106B rs1990622位点多态性与CSF Aβ_1-42水平存在显著关联(β=58.637,t=2.664,P<0.001)。结论 TMEM106B rs1990622位点多态性与CSF Aβ_1-42水平存在关联,TMEM106B可能是通过影响CSF Aβ_1-42代谢参与AD的疾病过程。

目的 研究吲哚-2,3-二酮(ISA)对SH-SY5Y细胞增殖与迁移的影响及其机制。方法 采用CCK-8实验检测ISA对SH-SY5Y细胞活力的影响,并计算其半致死浓度(IC₅₀值)作为后续实验中浓度设定的参考值。以IC₅₀值为依据,向SH-SY5Y细胞中分别加入总浓度为0、50、100、200 μmol/L的ISA(A、B、C、D组),采用平板克隆实验、划痕实验、细胞凋亡率检测及PI染色流式细胞仪(FCM)分析实验检测ISA对各组SH-SY5Y细胞增殖、迁移、凋亡及细胞周期的影响。采用Western blot实验检测各组SH-SY5Y细胞中Bax、Bcl2等蛋白的相对表达量。结果 CCK-8实验结果显示,随着ISA浓度的增加,SH-SY5Y细胞活力明显下降(F=1 632.62,P<0.05);平板克隆结果显示,随着ISA药物浓度的增加,细胞的集落形成能力被抑制(F=1 038.21,P<0.05);划痕实验结果显示,细胞的迁移能力随着ISA浓度的增加而明显下降(F=147.86,P<0.05);流式细胞仪检测结果显示,随着ISA浓度增加,细胞的凋亡率明显增高(F=557.71,P<0.05);PI染色法结果显示,随着ISA浓度的增加,细胞的G₁周期构成比明显增高(F=632.38,P<0.05);Western blot实验结果显示,随着ISA浓度的增加p-JAK2、p-STAT3及Bcl2蛋白的表达量明显下降(F=286.56~541.13,P<0.05),而Bax的蛋白表达水平则明显升高(F=464.50,P<0.05)。结论 ISA 可以有效地抑制神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的增殖以及迁移,其抑制作用可能是通过调节JAK2/STAT3通路实现的。

目的 探讨褪黑素对妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus,GDM)大鼠胰腺自噬的影响及其机制。方法 将28只大鼠随机分为正常妊娠组(A组)、GDM组(B组)、GDM褪黑素低剂量组(C组)及GDM褪黑素高剂量组(D组),每组7只。检测各组大鼠血清中葡萄糖、胰岛素及糖化血红蛋白水平,并制作各组大鼠胰腺组织病理切片,HE染色观察各组大鼠胰腺组织病理变化,Tunel染色检测胰腺细胞凋亡情况,透射电镜检测胰腺组织自噬情况,免疫印迹法检测胰腺组织中自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)、Beclin1、磷酸化磷脂酰肌醇-3-激酶(p-PI3K)、磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、蛋白激酶B(AKT)、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的表达水平。结果 各组大鼠血清葡萄糖、胰岛素及糖化血红蛋白水平比较均有显著差异(F=52.26~66.73,P<0.05);与A组相比,B组大鼠血清葡萄糖、胰岛素及糖化血红蛋白水平显著升高(t=-14.45~7.23,P<0.05);与B组相比,C组、D组大鼠血清葡萄糖、胰岛素及糖化血红蛋白含量显著降低(t=-5.32~10.02,P<0.05)。HE染色、Tunel染色及透射电镜观察结果显示,与A组大鼠相比,B组大鼠胰腺组织病理损伤及细胞凋亡加重,胰腺组织自噬水平增加;与B组大鼠相比,C、D组大鼠胰腺组织病理损伤及细胞凋亡减轻,胰腺组织自噬水平降低。免疫印迹法结果显示,各组大鼠胰腺组织中LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR水平以及Beclin1相对表达量比较差异均具有显著性(F=27.68~67.72,P<0.05);与A组大鼠相比,B组大鼠胰腺组织LC3Ⅱ/LC3Ⅰ水平和Beclin1相对表达量均显著升高(t=-8.13~-6.83,P<0.05),p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR水平显著下降(t=8.83~14.05,P<0.05);与B组大鼠相比,C、D组大鼠胰腺组织LC3Ⅱ/LC3Ⅰ水平和Beclin1相对表达量均显著下降(t=3.36~6.95,P<0.05),p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR水平均显著升高(t=-9.64~-3.51,P<0.05)。结论 褪黑素能改善GDM大鼠胰腺组织的病理损伤,其具体机制可能与调控PI3K/AKT通路抑制GDM大鼠胰腺组织自噬有关。

目的 探讨分泌载体膜蛋白2(SCAMP2)在结直肠癌(colorectal cancer,CRC)中的表达及其意义。方法 收集2014年1月—2016年8月青岛大学附属医院309例原发性CRC患者的石蜡组织样本及临床病理资料,采用免疫组织化学法检测SCAMP2在CRC组织及癌旁正常组织中的表达水平。结果 SCAMP2在CRC组织中低表达,在癌旁正常组织中高表达。CRC组织及癌旁正常组织中SCAMP2的表达水平差异具有统计学意义(t=5.042,P<0.05)。在CRC组织中SCAMP2表达水平与肿瘤大小、微卫星不稳定性(MSI)有关(χ²=6.953、4.923,P<0.05)。结论 SCAMP2在CRC组织中低表达,可能与CRC的发生发展密切相关,SCAMP2低表达的CRC患者肿瘤体积较大,提示SCAMP2可作为CRC潜在的治疗靶点。

目的 探讨聚多巴胺(PDA)并木犀草素(LUT)通过光热治疗对细胞毒性淋巴细胞(CTL)肿瘤杀伤作用的影响。方法 通过扫描电子显微镜(SEM)和接触角测定仪观察和测定合成PDA的表征。将RAW264.7细胞分为Control组、LPS组(2 μg/L)、PDA'组(50 000 μg/L),常规培养48 h,采用CCK8实验检测细胞活力,通过流式细胞术检测LUT对RAW264.7细胞分化的影响。将雌性C57BL/6小鼠随机分为模型组、PDA组、LUT组以及PDA+LUT组,各组小鼠的后背部均皮下注射B16F10黑色素瘤细胞,建模后第10天在PDA组和PDA+LUT组建模小鼠肿瘤处注射PDA行光热治疗1次后,对建模小鼠右大腿肌肉分别注射PBS、PDA(2.5 μg/只)、LUT(500 μg/只)、PDA(2.5 μg/只)+LUT(500 μg/只),观察建模小鼠肿瘤生长以及存活情况。在治疗后第3、7天,取各组建模小鼠脾脏制备单细胞悬液,采用流式细胞术检测小鼠体内巨噬细胞分化和T细胞表达情况。 结果 SEM观察到合成的PDA具有较强的吸附能力和亲水性,并且CCK8实验检测结果显示PDA对细胞活力无影响(P>0.05)。各组RAW264.7细胞的CD206和iNOS平均荧光强度差异有显著性(F=30.72、1 516.00,P<0.05)。注射或不注射PDA时,则注射或不注射LUT小鼠的肿瘤大小和体内免疫细胞iNOS、CD206、IFN-γ⁺CD4⁺、TNF-α⁺CD8⁺表达水平比较差异均有显著性(F=23.10~235.52,P<0.05);注射或不注射LUT时,则注射或不注射PDA小鼠的肿瘤大小和体内免疫细胞iNOS、CD206、CD4⁺IFN-γ⁺、CD8⁺TNF-α⁺表达水平比较差异均有显著性(F=8.98~200.67,P<0.05);建模小鼠中PDA+LUT组存活率与其他组相比显著提高(χ²=9.70,P<0.01)。结论 LUT具有抑制小鼠巨噬细胞向M2分化并促进其向M1分化的作用,PDA并LUT治疗可以有效抑制小鼠肿瘤生长,提高生存率,增强CTL的肿瘤杀伤作用。

目的 研究新型热休克蛋白90(Hsp90)/组蛋白去乙酰化酶(HDAC)双靶点抑制剂FXX-W-12-4对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响及其机制。方法 采用CCK-8实验检测FXX-W-12-4对MDA-MB-231细胞活力的影响,并计算其半致死浓度(IC₅₀)作为后续实验中浓度设定的参考值。以IC₅₀值为依据,在MDA-MB-231细胞中分别加入终浓度为0、100、200、300 nmol/L的FXX-W-12-4(分别设为A、B、C、D组),采用划痕实验、Transwell实验分别检测FXX-W-12-4对各组MDA-MB-231细胞侵袭以及迁移能力的影响。采用Western Blot实验检测各组MDA-MB-231细胞中ac-H3、Hsp70等蛋白的相对表达量。结果 CCK-8实验结果显示,随着FXX-W-12-4浓度的升高,MDA-MB-231细胞活力逐渐下降(F=2 663.00,P<0.05)。划痕实验结果显示,与A组相比,B~D组MDA-MB-231细胞在第12、24、48小时时迁移能力均明显降低(F=86.47~212.59,P<0.05)。Transwell实验结果显示,与A组相比,随着FXX-W-12-4浓度的升高,B~D组MDA-MB-231细胞的侵袭能力均受到了抑制(F=68.67,P<0.05)。Western Blot检测结果显示,与A组比较,随着FXX-W-12-4浓度的增加,B~D组MDA-MB-231细胞中ac-H3、Hsp70蛋白相对表达量显著性增高(F=645.60、1 017.00,P<0.05),而p-Akt、p-mTOR蛋白表达量显著性下降(F=480.30、14.32,P<0.05)。结论 新型Hsp90/HDAC双靶点抑制剂FXX-W-12-4可有效抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、侵袭和迁移,其抑制作用可能是通过调节Akt/mTOR通路实现的。

目的 探讨人脂肪间充质干细胞条件培养基(ADSCs-CM)对1-甲基-4-苯基吡啶(MPP⁺)诱导的SH-SY5Y细胞神经保护作用及其机制。方法 将SH-SY5Y细胞分为Ctrl组、PD组、CM组,Ctrl组置于基础培养基中培养,PD组于MPP⁺(1.0 mmol/L)+基础培养基中培养,CM组于MPP⁺(1.0 mmol/L)+ADSCs-CM培养,均培养24 h。分别使用活性氧(ROS)试剂盒、三磷酸腺苷(ATP)试剂盒、线粒体复合物Ⅰ(CⅠ)活性试剂盒检测各组SH-SY5Y细胞中ROS含量、ATP总量和线粒体CⅠ活性;使用单丹磺酰尸胺(MDC)荧光法观察各组SH-SY5Y细胞自噬率;采用Western blot方法检测各组SH-SY5Y细胞线粒体自噬相关蛋白P62、LC3的表达水平。结果 PD组与Ctrl组、CM组比较,SH-SY5Y细胞的ROS含量、ATP总量、线粒体CⅠ的活性、细胞自噬率、P62、LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白相对表达量比较差异均有显著性(t_LSD=3.23~12.61,P<0.05)。结论 ADSCs-CM可改善MPP⁺诱导的SH-SY5Y细胞中线粒体的功能障碍,其作用机制可能是通过影响自噬相关蛋白P62、LC3的表达实现的。

目的 探讨丁酸钠对高尿酸血症小鼠肠道屏障的保护作用。方法 雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组、丁酸钠组。模型组小鼠每天腹腔注射氧嗪酸钾250 mg/kg,自由取食高酵母饲料,丁酸钠组小鼠在模型组基础上每天灌胃丁酸钠200 mg/kg,对照组小鼠每天腹腔注射和灌胃等剂量生理盐水,共干预21 d。采用蛋白免疫印记法(Western blot)、实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)和免疫组化染色法检测各组小鼠小肠组织中ZO-1、Occludin蛋白和mRNA的表达水平,采用苏木素-伊红染色(HE)观察各组小肠组织的病理形态,采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测小肠组织中炎症因子的含量。结果 3组小鼠体质量比较差异具有显著意义(F=4.70,P<0.05),其中模型组与对照组相比体质量显著降低(t=3.03,P<0.05),丁酸钠组与模型组相比体质量显著升高(t=2.90,P<0.05)。Western blot、RT-qPCR和免疫组化染色结果显示,模型组与对照组、丁酸钠组相比小肠组织ZO-1和Occludin蛋白和mRNA表达量比较差异均有显著性(t=2.55~11.04,P<0.05)。HE染色结果显示,模型组小鼠小肠绒毛大量减少、断裂,丁酸钠组小肠绒毛相对完整。模型组与对照组、丁酸钠组相比小肠组织TNF-α和IL-6水平比较差异均有显著性(t=5.74~9.79,P<0.05)。结论 高尿酸血症模型小鼠存在肠道屏障损伤,灌胃补充丁酸钠可以保护高尿酸血症模型小鼠的肠道屏障。

目的 探讨建立一种体外定点突变体或CRISPR/cas9介导的敲入突变体的快速筛选方法,以提高突变体筛选效率,降低实验成本。方法 针对构建的体外定点突变体或CRISPR/Cas9介导的敲入突变体,采用3'端第1、2和3个核苷酸分别与突变序列相匹配的筛选引物进行聚合酶链式反应(PCR),通过琼脂糖凝胶电泳检测是否有特异性扩增条带。结果 利用特异性突变筛选引物进行PCR在正确的突变体中有效地扩增出了DNA条带,而在未成功突变的样本中则无法扩增,琼脂糖凝胶电泳显示有DNA扩增条带,证明正确突变体筛选成功。结论 本研究建立的突变体快速筛选方法能够简便快速地筛选出正确突变体,明显简化了突变体的鉴定过程,可有效降低实验成本,提高工作效率。

目的 探讨健侧半球经颅直流电刺激(tDCS)对亚急性期非流利性卒中后失语(post stroke aphasia,PSA)的治疗效果。方法 选取2020年6月—2021年9月于青岛大学附属医院西海岸院区康复医学科住院的亚急性期非流利性PSA患者58例,随机分为阳极刺激组(19例)、阴极刺激组(20例)和假刺激组(19例),在常规语言治疗基础上同步实施tDCS,每天1次,每周治疗5 d,共治疗3周。在治疗开始前及结束后采用西方失语症成套测试(WAB)汉化版评估患者自发语言、听理解、复述、命名、失语商(AQ),并进行比较。结果 3组患者治疗后各项WAB评分均较治疗前显著改善(t=5.349~12.220,P<0.05);阳极刺激组患者的自发语言、听理解、命名、AQ改善度方面均显著优于阴极刺激组及假刺激组(F=4.360~10.340,q=3.426~5.695,P<0.05),3组患者的复述改善度比较差异均无显著性(P>0.05)。结论 使用tDCS阳极刺激亚急性期非流利性PSA患者的右半球Broca同源区,可有效改善患者的自发语言、听理解、命名、AQ。

目的 探讨仑伐替尼对于肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织中肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)自噬和迁移的影响。方法 分离并培养HCC患者肿瘤组织中原代CAFs,分别使用等体积的DMSO和46 nmol/L的仑伐替尼处理72 h,分为DMSO组和仑伐替尼组,对两组细胞进行转录组学测序分析和药物靶点组学分析,对差异表达基因和差异表达肽段进行GO功能和KEGG信号通路富集分析;使用透射电镜观察仑伐替尼对CAF自噬的影响,通过Transwell和划痕实验检测仑伐替尼对CAFs迁移能力的影响。结果 DMSO组与仑伐替尼组之间的差异表达基因和差异肽段主要富集在细胞迁移、自噬等相关功能和通路上;透射电镜观察显示,仑伐替尼组CAFs的自噬小体明显多于DMSO组(t=5.376,P<0.05),Transwell和划痕实验结果显示,仑伐替尼组CAFs迁移能力明显弱于DMSO组(t=10.31、14.33,P<0.05)。结论 仑伐替尼可诱导HCC组织中CAFs自噬,并抑制其迁移。

痛风的发病率逐年升高,目前已成为中国仅次于糖尿病的第二大代谢类疾病,给患者的健康带来较大危害。难治性痛风患者血尿酸水平难以控制,病情较重,需引起人们的高度重视。基于此,本撰写组成员邀请国内对痛风诊治具有丰富经验的中西医专家,借鉴国内外痛风相关疾病的指南和共识,制订《难治性痛风中西医结合治疗专家共识》。本共识旨在规范难治性痛风的疾病管理流程,对难治性痛风中西医结合治疗的用药做出推荐,为难治性痛风的诊疗提供更具实操性的指导意见。

目的 探讨血液中中性粒细胞淋巴细胞比值(NLR)、血小板淋巴细胞比值(PLR)及全身免疫炎症指数(SII)与腺样体肥大患儿腺样体肥大程度的关系。方法 选取2020年2月—2021年2月就诊于我院耳鼻咽喉头颈外科,经电子纤维喉镜确诊为腺样体肥大患儿181例。根据腺样体肥大分型及分度将患儿分为病理性腺样体肥大(Ⅲ~Ⅳ度肥大)组和生理性腺样体肥大(Ⅰ~Ⅱ度肥大)组(A组),进一步将病理性腺样体肥大组患儿分为Ⅲ度肥大组(B组)和Ⅳ度肥大组(C组)。比较各组间血浆NLR、PLR、SII差异,并分析上述指标对患儿腺样体肥大程度的影响。结果 三组患儿间血浆NLR及SII比较差异有显著性(F=27.346、22.533,P<0.001),血浆PLR水平比较则无显著差异(P>0.05),C组患儿血浆NLR、SII显著高于A、B组(P<0.05),B组患儿血浆NLR、SII显著高于A组(P<0.05)。ROC曲线显示血浆NLR、SII诊断病理性腺样体肥大曲线下面积分别为0.809和0.763,NLR诊断病理性腺样体肥大的灵敏度、特异度分别为93.85%和52.94%,SII诊断的灵敏度、特异度分别为42.31%和98.04%;当血浆NLR≥0.57和(或)SII≥356.41时,提示病理性腺样体肥大(Ⅲ度及以上肥大)可能性较大。结论 血浆NLR和SII与儿童腺样体肥大程度具有相关性,且可作为初步预测病理性腺样体肥大的简易参考指标。

目的 探讨烟酰胺腺嘌呤二核苷酸依赖的去乙酰化酶1(Sirt1)对高糖诱导的足细胞外泌体释放的影响。方法 将永生化小鼠足细胞MPC5分为正常糖组(5.5 mmol/L葡萄糖,A组)、高渗组(5.5 mmol/L葡萄糖+24.5 mmol/L甘露醇,B组)、高糖组(30.0 mmol/L葡萄糖,C组)、高糖+Sirt1过表达慢病毒转染组(Sirt1过表达慢病毒转染+30.0 mmol/L葡萄糖,D组)、高糖+阴性慢病毒转染组(阴性慢病毒转染+30.0 mmol/L葡萄糖,E组)、高糖+外泌体分泌抑制剂组(GW4869+30.0 mmol/L葡萄糖,F组)6组。采用免疫印迹法检测各组细胞Sirt1、足细胞裂孔膜蛋白(Nephrin、Podocin)及CD63、CD81、Alix的表达水平,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测D、E组细胞Sirt1 mRNA表达水平,使用透射电子显微镜观察足细胞外泌体形态,采用纳米粒子跟踪分析技术检测外泌体的粒径和浓度。结果 RT-qPCR结果显示,D组足细胞Sirt1 mRNA相对表达量显著高于E组(t=14.580,P<0.01)。纳米粒子跟踪分析及免疫印迹结果显示,A~C组间足细胞Sirt1、Nephrin和Podocin蛋白相对表达量比较差异均具有显著性(F=49.84~106.40,P<0.01);与A组相比,C组足细胞外泌体分泌显著增加(t=14.550,P<0.01),Nephrin、Podocin、Sirt1相对表达量显著减少(t=7.446~15.110,P<0.01);与E组相比,D组足细胞外泌体分泌显著减少(t=74.610,P<0.01),Nephrin、Podocin、Sirt1相对表达量显著增加(t=4.657~32.860,P<0.05);与C组相比,F组足细胞外泌体分泌显著减少(t=16.300,P<0.05),Nephrin、Podocin相对表达量显著增加(t=3.790、8.151,P<0.01),Sirt1表达水平无统计学差异(P>0.05)。结论 高糖诱导的足细胞Sirt1减少可促进外泌体分泌及足细胞损伤。

目的 探讨神经调节素1β(NRG1β)对氧糖剥夺/复氧(OGD/R)诱导的PC12细胞损伤的保护作用及其机制。方法 建立PC12细胞OGD/R模型,随机分为对照组(常规培养)、模型组(OGD/R处理)以及干预组(给予OGD/R处理+NRG1β干预),采用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测各组细胞的活力,采用荧光强度分析技术检测各组细胞活性氧(ROS)水平,采用荧光分光光度法检测各组细胞丙二醛(MDA)水平及还原型谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽(GSH/GSSG)吸光度比值,采用透射电镜观察各组细胞线粒体损伤情况,采用Western blot方法检测各组细胞中谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)的表达情况。结果 与对照组比较,模型组的细胞活力显著下降(t=25.76,P<0.01),ROS水平显著升高(t=12.43,P<0.01),GSH/GSSG吸光度比值显著降低(t=9.17,P<0.01),MDA水平显著升高(t=29.46,P<0.01);与模型组比较,干预组的细胞活力显著升高(t=8.03,P<0.01),ROS水平显著降低(t=10.34,P<0.01),GSH/GSSG吸光度比值显著升高(t=15.71,P<0.01),MDA水平显著降低(t=2.96,P<0.05)。透射电镜结果显示,与对照组相比,模型组线粒体损伤增加,NRG1β干预后减缓了线粒体损伤。Western blot方法显示,模型组GPX4表达水平较对照组显著降低(t=23.06,P<0.01),而干预组较模型组显著升高(t=6.07,P<0.05)。结论 NRG1β可通过影响铁死亡关键蛋白GPX4的表达,缓解OGD/R诱导的PC12细胞损伤。

目的 基于机器学习分析使用呋塞米的住院患者与急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)发生及死亡风险的相关性,并构建风险预测模型。方法 本研究纳入2017年10月—2020年10月我院使用呋塞米的住院患者18 998例。利用轻量梯度提升机(LightGBM)等8种机器学习算法,建立呋塞米相关性AKI以及死亡风险的评估模型。使用受试者工作特征(ROC)曲线、决策曲线分析(DCA)等方法评价模型的区分度、校准度及临床实用性。使用SHAP摘要图对曲线下面积(AUC)最高的预测模型进行特征重要性分析,使用SHAP力图与SHAP决策图解释患者AKI发生及死亡概率预测的个体化决策过程。结果 在8种机器学习模型中,LightGBM模型预测AKI发生与死亡风险的AUC为0.814和0.949,ROC及DCA曲线等表明该模型在校准度和临床应用等方面性能良好。SHAP摘要图提示使用呋塞米后患者血肌酐、血清胱抑素C、尿微量白蛋白/肌酐比值、联合使用肾上腺素及联合使用肝素是影响AKI发生的5个最主要因素;使用呋塞米后的24 h尿蛋白定量、血浆凝血酶原时间国际标准化比值、血浆血小板计数、联合应用肾上腺素及住院期间发生AKI是导致患者死亡的5个最主要因素。结论通过机器学习算法建立了使用呋塞米的住院患者发生AKI以及死亡风险的评估模型,该模型可以有效预测患者AKI发生及死亡风险的影响因素。

目前,我国肿瘤发病率逐年攀升,每年新发肿瘤患者数目已居世界首位。现今肿瘤常规治疗方法为手术联合放化疗、靶向治疗和免疫治疗,但不同肿瘤患者对化疗药物敏感性存在巨大差异,故通过体外药物敏感性筛选技术筛选患者最为敏感的药物,从而指导患者个体化用药尤为重要。目前肿瘤患者个体化用药筛选技术较多,每项技术各有优缺点,本文对常用的几种技术的应用进行综述,为肿瘤患者个体化用药技术的筛选提供参考。

目的 分析青中年高级别B细胞淋巴瘤(HGBL)患者的临床特征、治疗效果与预后。方法 回顾性分析27例青中年HGBL患者的临床资料。结果 在27例青中年HGBL患者中,相较于HGBL非特指型(HGBL-NOS)患者,Ann Arbor分期晚、aaIPI评分高、结外受侵器官多、骨髓累及在双重/三重打击淋巴瘤(HGBL-DT)患者中更常见,差异具有统计学意义(P<0.05)。在近期疗效对比中,HGBL-NOS患者的总有效率优于HGBL-DT患者,差异具有统计学意义(P<0.05)。在远期疗效对比中,HGBL-NOS患者的疾病无进展生存期与总生存期均优于HGBL-DT患者,差异具有统计学意义(P<0.05)。在6例早期HGBL-NOS患者中,接受R-CHOP/EPOCH方案的治疗者3例,接受高强度化疗方案的治疗者3例,其疗效均达到缓解。在9例晚期HGBL-NOS患者中,接受R-CHOP/EPOCH方案的治疗者8例,其中5例疗效达到缓解;接受高强度化疗方案的治疗者1例,该患者疗效达到CR。结论 在青中年患者中,HGBL-DT较HGBL-NOS侵袭性更强、预后更差,HGBL-DT患者可以考虑行高强度化疗方案治疗。

目的 探讨高强度阿托伐他汀(ATO)导致肝损伤小鼠肠道菌群的改变及其与肝组织中CYP2E1的关系。方法 C57BL/6小鼠40只,按照处理方式不同分为4组,每组10只,低强度ATO组(ATO-L组)、中强度ATO组(ATO-M组)、高强度ATO组(ATO-H组)小鼠每天分别灌胃含有10、20、30 mg/kg ATO的生理盐水1 mL,对照组(CON组)小鼠每天灌胃等量生理盐水,持续4周。HE染色后透射电镜下观察各组小鼠肝脏病理状态,检测各组小鼠血清中ALT、AST、TNF-α、IL-6和IL-10水平以及肝脏组织中SOD活力、CYP2E1的mRNA水平,采用16SrDNA测序法分析小鼠新鲜粪便中肠道菌群分布,将差异有显著意义的菌属的相对丰度与肝脏组织中CYP2E1 mRNA水平及SOD活力进行相关性分析。结果 经HE染色及透射电镜下观察显示,ATO-M组、ATO-H组小鼠肝脏均出现不同程度的损伤现象;各组小鼠血清中ALT、AST、IL-6、TNF-α和肝脏组织中SOD活力差异有显著性(F=4.57~7.74,P<0.05)。ATO-H组小鼠肠道菌群稳态失衡,ATO-H组拟杆菌门、厚壁菌门、变形菌门和脱铁杆菌门的相对丰度与CON组比较,差异有显著性(t=2.89~5.22,P<0.05);两组紫单孢菌科、普氏菌科、乳杆菌科、毛螺菌科、螺杆菌科的相对丰度差异有显著性(t=2.45~5.46,P<0.05);两组螺杆菌属、拟普雷沃菌属、普氏菌属和乳杆菌属的相对丰度差异具有显著性(t=2.46~7.41,P<0.05)。乳杆菌属的相对丰度与肝脏组织SOD活力呈正相关(r=0.48,P<0.05),与肝组织中CYP2E1的mRNA水平呈负相关(r=-0.62,P<0.05)。结论 高强度他汀类药物可导致小鼠肠道菌群稳态失衡,抗氧化应激能力下降,肠道菌群乳杆菌属的减少可能会促进肝脏的氧化应激反应。

大量研究发现新型冠状病毒(SARS-CoV-2)会对脑部的小血管产生潜在危害,并可能进一步导致神经系统的损伤。本文结合案例分析了COVID-19患者继发的不同类型脑小血管病(cerebral small vessel diseases,CSVDs)及SARS-CoV-2诱发CSVDs的机制,旨在为CSVDs发病机制及其预防提供新思路,并为SARS-CoV-2感染患者定期行颅脑影像学检查提供理论依据。

目的 总结SCN1A基因突变所致遗传性癫痫伴热性惊厥附加症(generalized epilepsy with febrile seizures plus,GEFS+)的临床特点及治疗情况,以增加对SCN1A基因突变的认识,为该病的临床诊疗提供依据。方法 收集我院神经内科就诊的1例GEFS+患儿及其家族成员的临床资料,采用三代基因测序技术对患儿及其父母、表姑的外周血DNA进行遗传学分析及验证。结果 患儿,女,7岁,因“发作性抽搐4年余”入院,发作时伴有意识丧失,发热时易发作,应用奥卡西平后发作增多,服用丙戊酸钠后发作控制。患儿父亲有痫性发作史,患儿表姑无临床症状,三代基因测序技术显示患儿、其父亲及表姑均有SCN1A基因c.4787G>A(p.R1596H)同一杂合突变。结论 GEFS+患者的发病与SCN1A 基因突变相关,但家系中患者的临床表现存在异质性,钠通道阻滞剂抗癫痫药物将加重GEFS+患者的痫性发作。

目的 研究非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)患者的血清中白细胞介素32(IL32)、IL-6以及肿瘤坏死因子α(TNFα)的水平,探讨IL-32、IL-6和TNF-α水平与NAFLD严重程度的关系。方法 收集青岛大学附属青岛市中心医院就诊的NAFLD患者87例作为观察组,根据肝脏受控衰减参数(CAP)将观察组分为轻度组、中度组和重度组,以同期体检健康者23例作为对照组,收集研究对象血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)、γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)等指标的资料,采用酶联免疫法检测所有研究对象血清IL-32、IL-6和TNF-α的水平。结果 对照组、轻度组、中度组与重度组相比以及中度组与对照组相比血清ALT水平差异有显著性(Z=-53.66~26.83,P<0.05)。对照组、中度组与重度组相比血清AST水平差异有显著性(Z=-38.92、-28.32,P<0.05)。中度组、重度组与对照组相比血清γ-GT水平差异有显著性(Z=29.54、-45.65,P<0.05)。对照组、轻度组、中度组与重度组进行比较,血清IL-32、IL-6、TNF-α水平差异均有显著性(t_LSD=3.44~6.71,P<0.05);中度组与对照组相比血清IL-32、TNF-α水平比较差异有显著性(t_LSD=-3.44、2.64,P<0.05)。所有研究对象的CAP与血清ALT、AST、γ-GT、IL-32、IL-6、TNF-α水平均呈正相关(r=0.51~0.66,P<0.05)。结论 NAFLD患者血清IL-32、IL-6和TNF-α水平明显升高,且与NAFLD严重程度呈正相关,其血清中的水平对反映肝细胞损害程度及判断NAFLD严重程度有一定临床意义。