吴晖, 刘大千, 秦路峰, 张钰, 杨学成 梁晔 牛海涛,
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目的 探讨低糖培养基筛选的低糖浓度耐受型膀胱肿瘤T24细胞系增殖和迁移能力的变化,以及其免疫检查点PD-L1表达量的变化。
方法 用不同葡萄糖浓度(2 000、1 500、1 000、500 mg/L)的培养基逐代筛选出低糖浓度耐受型膀胱肿瘤T24细胞系。将耐1 000 mg/L葡萄糖浓度培养基的T24细胞设为A组,将耐500 mg/L葡萄糖浓度培养基的T24细胞设为B组,将普通T24细胞设为C组。通过乳酸浓度检测比较不同组别细胞糖酵解能力的差异。通过细胞划痕实验测定不同组别细胞的迁移能力。通过MTT法检测不同组别细胞的增殖能力。通过荧光定量PCR技术检测不同组别细胞PD-L1 mRNA的表达水平。采用Western Blot方法检测不同组别细胞PD-L1蛋白的表达水平。
结果 乳酸浓度检测结果显示,B组和A组乳酸生成量较C组明显增加(F=30.72,q=7.29、10.88,P<0.05),且B组大于A组(q=3.59,P<0.05)。划痕实验结果显示,B组和A组迁移能力较C组明显增强(F=13.11,q=6.39、6.15,P<0.05),A、B组间比较差异无显著性(P>0.05)。MTT法检测结果显示,B组与A组的膀胱肿瘤增殖能力较C组明显增强(F=63.22,q=9.32、21.99,P<0.05),而且B组大于A组(q=6.42,P<0.05)。荧光定量PCR以及Western Blot方法检测结果证明,无论在mRNA还是蛋白水平,PD-L1的表达量均为B组>A组>C组。
结论 低糖浓度耐受型膀胱肿瘤细胞系相较于非低糖浓度耐受型膀胱肿瘤细胞系糖酵解、迁移及增殖能力增强,并且其免疫检查点PD-L1的表达亦有明显增加,可能可以作为膀胱肿瘤的潜在治疗靶点。